乙型肝炎病毒基本核心启动子变异对启动子活性及病毒复制力影响的研究

发布时间：2023-05-10 05:25

　　乙型病毒性肝炎是一种世界性的传染病,由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染所引起,是肝衰竭、肝硬化和肝癌发生的高危因素。HBV由于其多聚酶/反转录酶(RT)缺乏校对功能,极易发生变异,是高变异病毒,其内部基本核心启动子(basal core promoter, BCP)基因序列的保守性对于维持病毒的活跃复制非常关键,该区变异可以影响HBV的复制力,降低病毒e抗原(hepatitis B e antigen, HBeAg)的合成,从而导致不同的临床结局。目前,BCP区的热点突变有T1753A/C、A1762T、G1764A、C1766T等,其中最为常见的是A1762T/G1764A双联突变,此外,C1766T/T1768A双联突变,以及A1762T/G1764A/C1766T和T1753C/A1762T/G1764A/C1766T等多联突变也较为常见。本实验通过对解放军第302医院近年收治的40例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)患者及40例慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure, ACLF)...

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 引言
    1.1 乙型肝炎病毒概述
        1.1.1 HBV 的基因组结构
        1.1.2 HBV 的生活周期
        1.1.3 HBV 的调控元件
    1.2 立论依据与意义
2 慢性乙型肝炎患者及慢加急性肝衰竭患者HBV 全基因克隆及序列分析
    2.1 研究对象
    2.2 实验试剂及主要仪器
    2.3 研究方法
        2.3.1 样品的收集、处理和保存
        2.3.2 HBV DNA 的提取
        2.3.3 HBV 全基因组序列扩增
        2.3.4 HBV DNA 的克隆
        2.3.5 HBV DNA 的测序及序列拼接
    2.4 结果分析
3 HBV 基本核心启动子突变对转录活性的影响
    3.1 实验试剂
    3.2 研究方法
        3.2.1 pGL3-BCP 双荧光素酶表达载体的构建
        3.2.2 重组载体的定点突变
        3.2.3 荧光素酶的检测
    3.3 结果分析
4 HBV 基本核心启动子突变对全基因组复制力的影响
    4.1 实验试剂
    4.2 研究方法
        4.2.1 基因组定点突变
        4.2.2 细胞转染
        4.2.3 转染效率的监测
        4.2.4 HBV DNA 复制力测定
    4.3 结果分析
5 讨论与结论
    5.1 讨论
    5.2 结论
致谢
参考文献
作者简介



本文编号：3813123