rhKD/APP的制备和对肝损伤保护作用的研究

发布时间：2023-06-03 15:08

　　本研究利用基因重组技术构建了hKD/APP真核表达载体,电转化毕赤酵母X-33后,筛选出稳定高效分泌表达的rhKD/APP工程菌株。经SDS-PAGE、离子交换层析、疏水层析、对胰蛋白酶的抑制特性和质谱测定,证明rhKD/APP与天然hKD/APP具有相同的序列和理化性质。利用80 L发酵罐优化发酵条件,采用甲醇诱导批式发酵,大量制备和纯化rhKD/APP用于生物活性的研究。用Seglen法分离大鼠原代肝细胞,分别在含2 %新生牛血清、rhKD/APP、BPTI及8 %新生牛血清条件培养基下观察rhKD/APP对大鼠原代肝细胞的影响。结果表明,添加rhKD/APP组的原代培养大鼠肝细胞在培养的第96 h存活的细胞数量显著高于2%新生牛血清组,在形态上仍具有典型的肝细胞样结构。发现了rhKD/APP具有延长原代培养大鼠肝细胞存活时间的生物学效应,其有效剂量和最高有效剂量分别为2.5μg·ml-1、10μg·ml-1。rhKD/APP在药效学研究方面,我们建立了小鼠急性CCl4肝损伤模型和大鼠慢性CCl4肝损伤模型,观察rhKD/APP对CCl4肝损伤小鼠血清酶及对肝脏组织病理变化的影响。...

【文章页数】：135 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
前言
第一章 文献回顾
    第一节 Kunitz 型蛋白酶抑制剂 BPTI
    第二节 人 Kunitz 型蛋白酶抑制剂hKD/APP
第二章 rhKD/APP 毕赤酵母高效分泌表达体系的建立和鉴定
    第一节 材料和方法
    第二节 实验结果
    第三节 讨论
第三章 rhKD/APP 大规模发酵及纯化
    第一节 材料和方法
    第二节 实验结果
    第三节 讨论
第四章 rhKD/APP 对原代培养大鼠肝细胞存活的影响
    第一节 材料和方法
    第二节 实验结果
    第三节 讨论
第五章 rhKD/APP 对小鼠急性肝损伤的保护作用
    第一节 材料和方法
    第二节 实验结果
    第三节 讨论
第六章 rhKD/APP 对大鼠慢性肝损伤的保护作用
    第一节 材料和方法
    第二节 实验结果
    第三节 讨论
研究总结
参考文献
附录一 rhKD/APP 序列分析
附录二 rhKD/APP 阳离子交换层析纯化图谱
附录三 rhKD/APP 质谱分析图
附录四 大鼠肝细胞光镜图片
附录五 病理学图片
攻读博士期间发表的学术论文及其它成绩
致谢
中文摘要
英文摘要



本文编号：3829532