SIRT1介导的TGFβ1信号通路在肝纤维化中的调控机制研究

发布时间：2023-06-06 20:53

　　[目的]TGFβ/smad途径是转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGFβ)发挥其作用最常见的途径,在肝纤维化的启动和肝星状细胞的激活与转化过程中起关键作用。沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)是一种还原型辅酶I依赖的组蛋白脱乙酰基蛋白酶,可通过抑制TGFβ影响肝纤维化的生理过程,但调控机制尚不明确,而研究SIRT1介导的TGFβ信号通路在肝纤维化中的调控机制,能为肝纤维化的治疗提供科学依据。本文选择经高脂饮食诱导的肝纤维化川西亚种猕猴和大鼠肝星状细胞(HSCT6),研究TGFβ/Smad信号通路上的相关因子:Smad7,磷酸化Smad3(phospho-Samd3),转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGFβ1),α-平滑肌肌动蛋白(SmoothMuscle Actin,α-SMA),以及SIRT1的水平变化,据此探讨(1)肝纤维化进程中SIRT对TGFβ/Smad通路的影响;(2)SIRT1介导的TGFβ信号通路在肝纤维化中的调控机制。[方法...

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摘要
Abstract
缩略词表
文献综述
    1 肝纤维化概况及发病机理
        1.1 肝纤维化诊断标准及治疗方法
            1.1.1 肝纤维化临床诊断
            1.1.2 肝纤维化的治疗
        1.2 肝纤维化动物模型
        1.3 肝纤维化相关通路研究
            1.3.1 TGFβ/smad信号通路
            1.3.2 PDGF信号通路
            1.3.3 NF-κB信号通路
            1.3.4 Wnt途径
    2 SIRT1概况与相关研究
        2.1 SIRT1的概况
        2.2 SIRT1与肝纤维化
        2.3 SIRT1与TGFβ/Smad信号通路
选题意义
论文实验
    第一章: SIRT1及TGFβ/Smad通路相关因子在猕猴肝纤维化进程中的表达
        1 实验材料
            1.1 实验动物
            1.2 实验仪器
            1.3 耗材与试剂
            1.4 部分溶液配制
        2 实验方法
            2.1 样品采集
            2.2 切片制作
            2.3 MASSON染色及肝纤维化评价与分组
            2.4 病理组织学观察
            2.5 血液生化指标检测
            2.6 免疫组织化学检测SIRT1, Smad7, phospho-Smad3, TGFβ1和α-SMA
                2.6.1 免疫组织化学SABC法
                2.6.2 图像分析及数据处理
            2.7 统计学分析
        3 实验结果
            3.1 肝活检组织病理变化
            3.2 猕猴血生化指标
            3.3 肝活检组织中SIRT1, Smad7, phospho-Smad3, TGFβ1和α-SMA免疫表达情况
        4 讨论与分析
    第二章: SIRT1对TGFβ/Smad信号通路的调控
        1 实验材料
            1.1 HSCT6细胞系
            1.2 实验仪器
            1.3 耗材与试剂
            1.4 部分溶液配制
        2 实验方法
            2.1 细胞培养及分组
            2.2 CCK8检测细胞毒性
            2.3 实时荧光定量PCR检测SIRT1,Smad7,Smad3,TGFβ1和α-SMA的基因表达量
                2.3.1 引物设计及用品处理
                2.3.2 细胞样品处理及RNA提取
                2.3.3 去除基因组DNA及反转录
                2.3.4 Real-time PCR
            2.4 蛋白质印迹法检测SIRT1, Smad7, phospho-Smad3, TGFβ1和α-SMA的蛋白表达量
                2.4.1 细胞蛋白提取
                2.4.2 BCA蛋白质浓度测定
                2.4.3 蛋白质电泳
                2.4.4 免疫印迹
                2.4.5 数据分析
            2.5 统计学分析
        3 实验结果
            3.1 CCK8细胞活性检测结果
            3.2 荧光定量PCR检测mRNA水平SIRT1,Smad7,Smad3, TGFβ1和α-SMA表达结果
            3.3 免疫印迹检测SIRT1, Smad7, phospho-Smad3, TGFβ1和α-SMA蛋白表达结果
        4 讨论与分析
结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3832205