IFN-λ与丙型肝炎患者应用IFN-α抗病毒治疗疗效的相关性研究

发布时间：2017-05-21 15:16

  本文关键词：IFN-λ与丙型肝炎患者应用IFN-α抗病毒治疗疗效的相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染可引起肝脏急慢性炎症，据世界卫生组织统计，全球约有1.8亿人感染HCV，其中约有4250万感染者在中国。约有20%-30%的HCV感染者在急性期可以自发清除病毒，而大部分HCV感染者转化为慢性丙型肝炎（Chronic Hepatitis C, CHC），其中30%CHC患者可进展为肝硬化，而且CHC患者发生肝细胞癌的机会为正常人的20-30倍。因此CHC已成为值得关注的全球性公众健康问题，迫切需要有效的抗病毒治疗方案。干扰素(interferon，IFN)是机体细胞在受到某些病毒感染后所分泌的一类特异性细胞因子，具有抗病毒、免疫调节及抗细胞增殖等多种生物学活性，根据IFN的氨基酸序列和生物学活性可分为三类：I、Ⅱ、Ⅲ型。I型INF包括IFN-α、IFN-β、IFN-ε、IFN-κ、IFN-δ和IFN-ζ等，其中IFN-α为临床上应用比较广泛的抗病毒药物之一；Ⅱ型INF仅有1种为IFN-γ；Ⅲ型INF即IFN-λ，包括IFN-λ1（IL-29）、IFN-λ2（IL-28A）和IFN-λ3（IL-28B）。目前标准的抗HCV治疗方案为聚乙二醇化干扰素-α（pegylated interferon α, PEG-IFN-α）联合利巴韦林（ribavirin, RBV），治疗4周时HCV-RNA转阴（HCV-RNA1000IU/ml）为快速病毒学应答（rapidvirologic response, RVR），若治疗治疗4周时HCV-RNA仍为阳性至治疗12周时HCV-RNA转阴（HCV-RNA1000IU/ml）为早期病毒学应答（eralyvirologic response, EVR）。已有研究证实RVR和EVR能很好的预测持续病毒学应答(sustained virological response，SVR)即治疗结束24周HCV-RNA小于1000IU/ml，其中获得RVR的患者约88%-100%可获得SVR，一旦达到SVR,99%以上可以维持病毒学应答5年甚至更久。但并不是所有丙型肝炎患者都可以获得满意的抗病毒疗效，影响抗病毒疗效的因素有病毒因素（如HCV基因型、基线病毒载量等）、药物因素（如IFN-α种类、IFN-α和RBV有明显的血液学和神经系统抑制等不良反应、IFN-α药代动力学特点等）、宿主因素［如对IFN-α耐受性不佳、免疫应答状态、IL-28B单核苷酸基因多态性(single nucleotide polyorphism, SNP)等］。 近几年一系列全基因组关联分析研究报道了丙型肝炎患者的IL-28BSNP不同位点的基因型（rs12979860、rs8099917、rs12980275）与抗病毒治疗应答密切相关，携带保护性基因型的丙型肝炎患者自发清除病毒、获得SVR的机率比携带非保护基因型的患者高，同时发现携带保护性基因型的丙型肝炎患者血清中的IL-29、IL-28A、IL-28B水平和外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)中的IL-29mRNA、IL-28AmRNA、IL-28B mRNA水平均高于携带非保护性基因型的患者，丙型肝炎患者血清中IL-29水平低于正常人、而IL-28A水平高于正常人，丙型肝炎患者肝组织中IL-28A mRNA和IL-29mRNA的表达高于正常人。已有研究证实，IFN-λ与IFN-α的结合受体及分布不同，但它们可以通过相同的信号传导通路，传导活化信号、诱导一系列干扰素激活基因的表达，IFN-λ与IFN-α可协同发挥抗病毒作用。上述研究表明，丙型肝炎患者IL-28B SNP与抗病毒治疗疗效密切相关，丙型肝炎患者体内IFN-λ水平与抗病毒治疗疗效可能有相关性。 已有研究证实，RVR和EVR可以很好的预测SVR，其中RVR能更好的预测SVR，本研究根据患者应用IFN-α治疗4周时HCV-RNA是否转阴分为快速病毒学应答（RVR）组和非快速病毒学应答（N-RVR）组，旨在探讨丙型肝炎患者体内IL-28B rs12979860基因型、IFN-λ水平与其应用IFN-α抗病毒治疗获得RVR是否有相关性及其临床意义。 方法：选取丙型病毒性肝炎患者45例，根据患者应用IFN-α治疗4周时HCV-RNA是否转阴（HCV-RNA1000IU/ml）分为快速病毒学应答(RVR)组21例和非快速病毒学应答组(N-RVR)组24例，另外设健康对照组(Normal)组15例。 1病毒学指标检测：应用微粒子酶联免疫法检测抗-HCV，采用荧光定量聚合酶链反应法检测HCV-RNA水平。 2收集血清，应用ELISA法检测血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平。 3收集新鲜外周抗凝血，用密度梯度离心法分离收集PBMCs：Trizol法抽提提取PBMCs中的总RNA，应用RT-PCR法检测PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA相对表达水平；提取PBMC中总蛋白，应用Western blot法检测外周血PBMC中IL-29、IL-28A和IL28B蛋白表达水平。 4留取丙型肝炎患者外周（含EDTA）抗凝全血，提取DNA，应用TapManMGB蛋白探针法检测IL-28B rs12979860基因型。 结果： 1血清中IL-29、IL-28A和IL-28B的表达水平 1.1健康对照组血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平分别为(11.78±0.78)、(268.13±9.82)、(267.26±8.26)。 1.2丙型肝炎患者在干扰素-α治疗前（0周）血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平：RVR组分别为(13.32±1.34)、(273.11±8.78)、(293.67±7.38)；N-RVR组分别为(10.58±1.44)、(243.05±9.48)、(254.85±8.67)。 1.3丙型肝炎患者在干扰素-α治疗4周时血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平：RVR组分别为(12.90±1.04)、(288.49±13.50)、(308.53±9.48)；N-RVR组分别为(10.14±0.46)、(253.53±4.37)、(247.34±6.39)。采用SPSS13.0软件统计学处理以上结果得出：RVR组血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平在治疗前、治疗4周时均明显高于N-RVR组，P 0.01差异有统计学意义（Table1）；而健康对照组处于RVR组和N-RVR组之间，其中IL-28B的水平明显低于RVR组、高于N-RVR组，P 0.01，差异有统计学意义（Table1）；丙型肝炎患者在干扰素-α治疗前与治疗4周血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平变化不大。 2将PBMCs中GAPDH的表达量设定为1.00，与GAPDH表达量相比，得出IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA相对表达水平2.1健康对照组PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA表达水平分别为(0.76±0.02)、(0.68±0.02)、(0.70±0.02)。 2.2丙型肝炎患者在干扰素-α治疗前（0周）PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA表达水平：RVR组分别为(0.80±0.02)、(0.79±0.02)、(0.72±0.02)；N-RVR组分别为(0.71±0.02)、(0.65±0.02)、(0.68±0.01)。 2.3丙型肝炎患者在干扰素-α治疗4周时PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA表达水平：RVR组分别为(0.80±0.02)、(0.79±0.01)、(0.74±0.02)；N-RVR组分别为(0.70±0.01)、(0.64±0.01)、(0.66±0.01)。采用SPSS13.0软件统计学处理以上结果得出：RVR组PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA表达水平在治疗前、治疗4周时均明显高于N-RVR组，P 0.01，差异有统计学意义（Table2）；而健康对照组处于RVR组和N-RVR组之间，其中IL-28A的mRNA表达水平低于RVR组，P 0.01，差异有统计学意义（Table2）；丙型肝炎患者在干扰素-α治疗前与治疗4周PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA表达水平变化不大。 3将PBMC中内参β-actin相对表达量设定为1.00，与β-actin表达量相比较，得出IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白的表达水平： 3.1健康对照组PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白的表达水平分别为(0.67±0.12)、(0.58±0.13)、(0.70±0.11)。 3.2丙型肝炎患者在干扰素-α治疗前（0周）PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白的表达水平：RVR组分别为(0.73±0.01)、(0.69±0.03)、(0.73±0.03)；N-RVR组分别为(0.52±0.02)、(0.48±0.03)、(0.53±0.03)。 3.3丙型肝炎患者在干扰素-α治疗4周时PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白的表达水平：RVR组分别为(0.73±0.09)、(0.70±0.11)、(0.77±0.09)；N-RVR组分别为(0.55±0.09)、(0.50±0.10)、(0.57±0.09)。采用SPSS13.0软件统计学处理以上结果得出：RVR组PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白表达水平在治疗前、治疗4周时均明显高于N-RVR组，P 0.05，差异有统计学意义（见Table3）；丙型肝炎患者在干扰素-α治疗前与治疗4周PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白的表达水平变化不大。 4IL-28B rs12979860CC型丙型肝炎患者血清和PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B水平明显高于CT和TT型患者，P 0.05差异具有统计学意义；CT型患者血清和PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B水平介于CC和TT型患者之间，其中血清中IL-28B水平明显高于TT型患者，PBMC中IL-28A mRNA水平明显高于TT型患者，P 0.05差异具有统计学意义（见Table4/5/6）。 5Pearson卡方相关分析法分析三种IL-28B rs12979860基因型与RVR率的关系，，结果：IL-28B rs12979860CC基因型携带者获得RVR率明显高于CT、TT基因型携带者（见Table7）。 6将丙型肝炎患者HCV-RNA基线水平、HCV分型、IL-28B rs12979860基因型、PBMC和血清中IL-29、IL-28A、IL-28B水平等多种因素与IFN-α抗病毒应答疗效进行logistic回归分析（Table8）； 6.1通过向后逐步排除法，进入回归方程的自变量为X3、X6、X12；卡方检验，χ2=32.183， P0.01，回归方程有统计学意义。回归方程：logitP=-2.76+2.94X3+3.30X6+6.58X12。6.2X3、X6、X12的logistic回归系数反应对RVR/N-RVR的影响：IL28B CC基因型对获得RVR的优势比（OR）为5.06；PBMC中IL28B mRNA水平每增加一个等级对获得RVR的优势比为6.28； PBMC中IL28B蛋白水平每增加一个等级对获得RVR的优势比为13.87。 结论：1丙型肝炎患者血清和PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平与RVR密切 相关。 2IL-28B rs12979860CC基因型与RVR密切相关。 3IL-28B rs12979860CC基因型、PBMC中在基因和蛋白水平高表达的IL-28B可能是RVR的预测因素。
【关键词】：丙型肝炎病毒 慢性丙型肝炎 干扰素-α 干扰素-λ 快速病毒学应答 持续病毒学应答
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R512.63
【目录】：

• 摘要4-9
• ABSTRACT9-14
• 前言14-17
• 材料与方法17-24
• 结果24-27
• 附图27-31
• 附表31-35
• 讨论35-39
• 结论39
• 参考文献39-42
• 综述 干扰素-λ与丙型肝炎患者抗病毒治疗的相关性42-52
• 参考文献49-52
• 致谢52-53
• 个人简历53

【共引文献】

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本文编号：384030