Smad3 siRNA表达载体的构建和筛选鉴定及该基因与糖基转移酶之间相关性的初步研究

发布时间：2023-08-25 22:51

　　目的:Smad3是肝纤维化进程中的TGF-β/Smads途径的一个重要蛋白,Smad3是介导TGF-β信号向细胞内传递、活化肝星状细胞的直接承担者,在肝纤维化发展进程中起着关键作用。本文以Smad3基因为研究对象,构建筛选出该基因的有效siRNA干扰载体,并初步探讨糖基转移酶ppGalNAc-T家族与Smad3基因之间的相互关系。 方法:遵循RNA干扰目标序列的选取原则,利用互联网资源对Smad3基因mRNA序列设计三条可能的小干扰RNA(siRNA),分别将这三段siRNA插入到RNA干扰真核表达载体pRNAT-U6.1/Neo中构建成三条干扰载体;脂质体介导三条载体转染至肝星状细胞,采用RT-PCR的方法筛选出其中一条对Smad3抑制作用最佳的载体,RT-PCR和Western-Blot进一步鉴定该载体对Smad3的抑制作用;接下来利用已构建筛选出的pRNAT-SiSmad3转染肝星状细胞,建立Smad3的下调表达模型,检测糖基转移酶ppGalNAc-T家族的表达情况,同时利用本实验室已经构建的干扰表达载体pSilenCircle-SiT2转染入肝星状细胞,建立下调表达ppGalN...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 Smad3 基因小干扰 RNA 序列的设计 及其表达载体的构建
    材料和方法
    结果
    讨论
    参考文献
第二部分 Smad3 有效 siRNA 表达载体筛选及鉴定
    材料和方法
    结果
    讨论
    参考文献
第三部分 Smad3 与糖基转移酶 ppGalNacTs 相关性研究
    材料和方法
    结果
    讨论
    参考文献
小结
附录一 中英文缩略对照表
附录二 攻读硕士学位期间发表的论文
本课题所获的基金资助
附录三 综述:肝纤维化的研究进展
    参考文献
致谢



本文编号：3843455