重组人成纤维细胞生长因子21的中试研究及其对非酒精性脂肪肝的治疗作用研究

发布时间：2023-08-26 03:56

　　成纤维细胞生长因子21(Fibroblast growth factor 21,FGF21)是成纤维细胞生长因子家族的新成员,是一种特异性作用于肝脏、胰岛、和脂肪组织的新型代谢调控因子。FGF21具有降低机体血糖血脂、改善胰岛素抵抗、保护胰岛β细胞等多种糖脂代谢调控的功能,因此,其在2型糖尿病、肥胖、动脉粥样硬化、脂肪肝等多种代谢综合症的临床应用方面极具潜力。 非酒精性脂肪肝病(Non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)是以肝小叶内的肝实质细胞脂肪变性、炎性细胞浸润和脂肪沉积为主要病理表现,但无伴随过量饮酒史、病毒感染或其他病原体的一种代谢综合症,目前在临床上尚无特效的NAFLD治疗药物。动物模型研究结果表明,FGF21能够显著降低血清中甘油三脂、胆固醇以及低密度脂蛋白的含量,显示其具有治疗NAFLD的潜能。本研究首先利用基因工程技术在大肠杆菌中高效表达可溶性重组人FGF21,并利用3T3-L1细胞测定重组蛋白的糖吸收活性。然后,通过建立NAFLD的动物模型,评估FGF21对NAFLD的治疗作用,并探讨其作用机制。 将含组氨酸标签的fgf21基因...

【文章页数】：126 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
第一章 前言
    1 成纤维细胞因子21的研究概况
        1.1 FGF21的结构
        1.2 FGF21的生物学功能
        1.3 FGF21的临床安全性与工程化现状
    2 非酒精性脂肪肝
        2.1 NAFLD的发病机制
        2.2 NAFLD的治疗现状
        2.3 FGF21与NAFLD
    3 立题依据及设计思路
第二章 FGF21的克隆表达、纯化及中试研究
    1 仪器与材料
    2 实验方法
        2.1 基因的设计、扩增与克隆
        2.2 重组蛋白FGF21的表达分析
        2.3 重组蛋白的发酵工艺
        2.4 重组蛋白rhFGF21的纯化鉴定
    3 实验结果
        3.1 基因的设计、扩增与克隆
        3.2 重组蛋白的表达
        3.3 重组蛋白的中试发酵
        3.4 重组蛋白的纯化与鉴定
    4 讨论
第三章 重组人成纤维细胞因子21的体外活性测定
    1 仪器与材料
    2 实验方法
        2.1 小鼠3T3-L1脂肪细胞培养及分化
        2.2 糖吸收活性测定实验
        2.3 rhFGF21对3T3-L1脂肪细胞中GLUT1 mRNA表达的影响
        2.4 HepG2细胞培养
        2.5 促增殖活性测定
        2.6 FGF21对AKT抑制剂(LY294002)引起的细胞存活力变化的影响
        2.7 数据分析
    3 实验结果
        3.1 3T3-L1分化为成熟的脂肪细胞
        3.2 rhFGF21对3T3-L1脂肪细胞的糖吸收促进作用
        3.3 rhFGF21对3T3-L1脂肪细胞GLUT1mRNA表达的影响
        3.4 rhFGF21对HepG2细胞的促增殖活性测定
        3.5 rhFGF21对LY294002引起的HepG2细胞存活力变化的影响
    4 讨论
第四章 高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝模型的建立
    1 实验仪器与材料
        1.1 实验仪器
        1.2 实验动物
        1.3 基础饲料
        1.4 高脂饲料
    2 实验方法
        2.1 实验动物饲养和分组
        2.2 处死动物,留取标本
        2.3 胰岛素含量测定和生化指标测定
        2.4 生化指标测定
        2.5 组织病理学检测
        2.6 数据分析
    3 实验结果
        3.1 体重及肝指数变化
        3.2 血清脂蛋白变化
        3.3 空腹胰岛素含量及稳态胰岛素评价指数
        3.4 肝功能相关酶活改变
        3.5 肝脏的组织病理学改变
    4 讨论
第五章 RHFGF21对小鼠非酒精性脂肪肝的治疗作用及其机制研究
    1 实验仪器与材料
        1.1 实验仪器及试剂
        1.2 实验动物
        1.3 基础饲料
        1.4 高脂饲料
    2 实验方法
        2.1 实验动物饲养和分组
        2.2 实验动物给药
        2.3 处死动物,留取标本
        2.4 血清学指标测定
        2.5 肝脏甘油三酯和胆固醇含量测定
        2.6 组织病理学检测
        2.7 rhFGF21对实验动物肝脏氧化应激水平的影响
        2.8 Western blot检测肝组织中脂代谢相关蛋白的表达
        2.9 Real time RT-PCR检测肝组织中相关基因的表达水平
        2.10 数据分析
    3 实验结果
        3.1 实验动物体重变化
        3.2 实验小鼠的肝指数
        3.3 实验动物的空腹血糖(FG)、空腹胰岛素(FINS)和稳态胰岛素评价指数
        3.4 实验动物的血脂测定结果
        3.5 实验动物的肝功能相关酶活测定
        3.6 实验动物的肝脏胆固醇、甘油三酯含量
        3.7 实验动物肝组织病理检查
        3.8 rhFGF21对实验动物肝脏氧化应激水平的影响
        3.9 rhFGF21对肝组织中脂代谢相关蛋白的表达影响
        3.10 rhFGF21对肝组织中脂代谢相关基因表达的影响
    4 讨论
小结
参考文献
附录
    附录一:各种试剂和培养基的配制
    附录二:DNA测序结果图
    附录三:PMF图谱
英文缩略词表
博士期间发表论文
致谢



本文编号：3843905