重组脂联素在非酒精性脂肪肝病中作用的初步探讨

发布时间：2023-10-03 19:09

　　目的:研究重组AdipoQ基因在真核细胞中的表达情况,利用电穿孔的方法将表达载体导入减毒沙门氏菌并表达,纯化蛋白,检测其在体外对L-02肝细胞脂肪变性的抑制作用,为人AdipoQ在NAFLD的基因治疗方面的应用奠定基础。 方法:(1)从人脂肪组织中提取总RNA,通过RT-PCR方法获得AdipoQ基因,将其克隆到真核荧光表达载体pEGFP-N1上,构建重组质粒pEGFP-N1- AdipoQ;(2)将重组质粒转染COS-7细胞,通过报告基因荧光蛋白的表达、RT-PCR和Western blot检测其融合蛋白在真核细胞中的表达;(3)将重组质粒pEGFP-N1- AdipoQ通过电穿孔的方法导入减毒沙门氏菌并表达;(4)通过亚克隆法构建重组质粒pET32a(+)-AdipoQ ,转化大肠杆菌BL21 ,以IPTG诱导表达pET32a(+)-AdipoQ融合蛋白。表达产物经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,用Western Blot分析;(5)将融合蛋白作用于油酸诱导脂肪变的L-02肝细胞,研究其对肝细胞脂肪变的抑制情况。 结果:(1)通过RT-PCR方法克隆得到AdipoQ基因片断,长度为7...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

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英文摘要
论文正文：重组脂联素在非酒精性脂肪肝病中作用的初步探讨
    前言
    第一部分 脂联素基因真核表达载体的构建及表达
        1 材料和方法
        2 实验结果
        3 讨论
    第二部分 重组脂联素-减毒沙门氏菌的构建及表达
        1 材料和方法
        2 实验结果
        3 讨论
    第三部分 重组脂联素蛋白对体外非酒精性脂肪性肝细胞模型的作用
        1 材料和方法
        2 实验结果
        3 讨论
全文总结
参考文献
附图
文献综述
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文



本文编号：3850474