乙肝病毒基因经人精子传递新途径研究：胚胎细胞相关基因的筛选与功能分析

发布时间：2023-10-14 09:33

　　背景与目的 乙型肝炎由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染所致,是危害人类健康的全球性疾病。由于该病流行面广,危害性大,因此其传播途径,发病机制及治疗手段的研究一直是各国政府和科学家们高度重视的课题。已有研究证实,HBV基因能够整合到精子的染色体上,由精子导入受精卵的HBV基因能够在早期胚胎细胞中复制与表达。然而,HBV具有嗜肝性,着床前的胚胎细胞是未分化的全能细胞,它既非肝脏细胞,也非已分化的非肝脏细胞,HBV基因为何能在其中复制和表达?是否有宿主基因参与了上述生物学事件?这些问题的阐明,不仅在病毒传播的分子机制研究中具有重要的理论意义,还在阻断HBV基因传播、提高生育素质和防止肝癌发生方面具有广阔的应用前景。 材料与方法 材料:(1)人精子;(2)金黄地鼠去透明带卵母细胞;(3)项目组前期工作获得的、经大肠杆菌(E. coli DH5α)转染扩增的阳性重组质粒pGEM-T-X;(4)实验用试剂与培养基。 方法:(1) PCR技术;(2)消减文库cDNA探针制备技术;(3)基因芯片技术;(4)测序技术;(5)生物信息学技术;(6)人精子与金黄地鼠去透明带卵母...

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【学位级别】：硕士

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英文摘要
主要缩略语中英文对照表
前言
技术路线
材料与方法
    1 材料
        1.1 质粒
        1.2 实验动物及标本
            1.2.1 金黄地鼠
            1.2.2 精液标本
        1.3 主要试剂
        1.4 主要仪器
        1.5 其它材料
        1.6 主要溶液及培养基（配制见附录）
    2 方法
        2.1 菌液PCR鉴定消减文库
            2.1.1 实验样本
            2.1.2 引物的设计和合成
            2.1.3 步骤
        2.2 芯片的制备
            2.2.1 阳性重组质粒的提取
            2.2.2 PCR扩增重组质粒中插入的cDNA片段
            2.2.3 PCR产物的纯化
            2.2.4 点制芯片
        2.3 探针的制备
        2.4 芯片的杂交与洗片
        2.5 差异表达基因的鉴定
            2.5.1 图像的扫描与分析
            2.5.2 确定阳性克隆
            2.5.3 测序
        2.6 靶标基因的认定及其功能分析
        2.7 宿主细胞中靶标基因存在及表达的验证
            2.7.1 RT-PCR引物的设计及合成
            2.7.2 样本收集和实验动物处理
            2.7.3 RT-PCR检测
结果
    1. 菌液PCR鉴定结果
    2. 芯片的准备
    3. 探针检测结果
    4. 芯片检测结果
        4.1 芯片扫描结果
        4.2 Cy3 和Cy5 相关性分析
        4.3 阳性克隆的筛选
    5. 测序结果
    6. 靶基因的认定及其功能分析
    7. 宿主细胞中靶标基因存在及表达的验证
        7.1 RT-PCR引物的设计及合成
        7.2 宿主靶标基因在胚胎细胞中存在与表达的证实
讨论
全文小结
特色与创新
参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献
个人简历



本文编号：3854060