血清kappa/lambda杂合抗体在自身免疫性胰腺炎诊断中的意义及其形成机制的研究

发布时间：2024-01-30 20:58

　　自身免疫性胰腺炎(AIP)是一种IgG4相关性疾病,往往伴有血清IgG4水平增高和胰腺外器官损伤,占所有慢性胰腺疾病的2%左右。由于胰头肿大和胆道后壁扩张,临床上多表现为梗阻性黄疸。血清IgG4是目前唯一公认的诊断自身免疫性胰腺炎的血清学标志物。当前,自身免疫性胰腺炎的发病原因及IgG4在疾病中的作用仍不清楚。精典抗体理论认为：一个成熟的浆细胞能够产生一种由两条相同的重链和两条相同的轻链(κ链或λ链)组成的完全对称性的抗体分子。在过去的10年中,越来越多的研究证明,IgG4是一种动态的抗体分子,能够通过“半分子”(通过二硫键连结的一条重轻链对)交换的作用形成具有两种抗原结合位点的非对称性抗体。最近的一项研究表明,正常人血清中含有大量的IgG4亚型构成的κ/λ杂合抗体,这种分子由两条IgG4类型的重链和一条κ轻链和一条λ轻链组成。因为自身免疫性胰腺炎通常伴有血清IgG4浓度的升高,所以我们尝试研究杂合抗体对于AIP的诊断以及与胰腺癌的鉴别诊断价值。我们建立了一种检测人血清杂合抗体的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。首先,利用抗人λ轻链的单克隆抗体包被ELISA板,再利用过氧化...

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图３．用于杂合抗体检测的双抗体夹也酶联免疫吸附实验??

３．用于杂合抗体检测的双抗体夹也酶联免疫吸附实验??ｄｏｕｂｌｅ－ａｎｔｉｂｏｄｙ?ｓａｎｄｗｉｃｈ?ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ?ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ?ａｓｓａｙｔｅｃｔｉｏｎ??件下巧测１０例健康体检者和１０例ＡＩＰ血清杂合抗体??酸盐包被缓冲液稀释抗人ｌａｍｂｄａ单克隆....

图４．竞争抑制实验??Ａ：不同浓度的未标记抗ｋａｐｐａ抗体作为竞争抑制分子与ＨＲＰ标记的抗ｋａｐｐａ抗体??

信号降低越明显。如果ａｎｔｉ－ｋａｐｐａ－ＨＲＰ仅能够与ｋａｐｐａ轻链反应，不能够与ｌａｍｂｄａ??轻链反应（即不与ｌａｍｂｄａ轻链存在交叉反应），则加入游离的ａｎｔｉ－ｌａｍｂｄａ抗体不??能够对检测信号带来影响。基本原理见图４。??化?Ｉ?人木柄?ｌｉ?化?／?＼?化?Ｉ、料....

图６．不同包被缓冲液对杂合抗体吸光度值影响的曲线图??注：横坐标：血清稀释度；纵坐标：吸光度值（ＯＤ４５０／６２０ｍｎ）??

抗人ｌａｍｂｄａ抗体分别用Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液（０．０１Ｍ，ｐＨ８．５）、憐酸盐包被缓冲??液（０．０１Ｍ，ｐＨ７．４）和碳酸盐包被缓冲液（０．０５Ｍ，ｐＨ９．６）包被后进行阳性血清??杂合抗体检测，结果如表７和图６所示，Ｈ种包被缓冲液的包被效果差异不大，碳??酸盐包被缓冲液（....

图７．不同封闭液对杂合抗体吸光度影响的曲线图??注：横坐标：血清稀释度；纵坐标：吸光度值（〇Ｄ４５０／６２０ｎｍ）??

２．２．２最佳封闭液的确定??选用３种不同的封闭液封闭效果均较理想，１％ＢＳＡ／ＰＢＳ和２０％小牛血清／ＰＢＳ??封闭液的封闭效果略优于１％明胶／ＰＢＳ封闭液（见表８和

本文编号：3890384