iNKT细胞对非酒精性脂肪肝病的调控作用及机制研究

发布时间：2024-02-02 11:13

　　背景随着人类生活方式的转变,非酒精性脂肪肝病(NAFLD)成为危害人类健康的主要疾病之一,目前尚缺乏特异性的治疗药物。研究表明,NAFLD的恶化与肝脏免疫环境的紊乱有关,而iNKT细胞作为免疫调节的中心细胞,在NAFLD中的确切作用及机制仍不明确。因此,本课题旨在探究iNKT细胞对非酒精性脂肪肝病的调控作用及相关机制,为以iNKT细胞为靶点的NAFLD的免疫学防治提供新的治疗策略。方法高脂饮食(HFD)和蛋氨酸/胆碱缺陷饮食(MCD)分别喂养C57BL/6J建立NAFL和NASH模型,腹腔注射α-Galcer进行干预。同时采用免疫磁珠分选技术(MACS)分离纯化脾脏iNKT2细胞,过继输入NASH小鼠体内。通过小鼠外观、体重、血液生化指标(TG、TCH、HDL、LDL、ALT、AST)、肝脏指数、肝脏组织H&E染色观察干预效果;流式细胞术检测肝脏和外周血iNKT细胞及其亚群(iNKT1/iNKT2);Western Blot检测肝脏组织SREBP-1c,PPAR-α,NF-κB等相关蛋白表达水平,体外观察IL-4对HepG2细胞脂肪变性模型的干预效果,探究α-Galcer和过继...

【文章页数】：104 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略词表
第一章 绪论
    1.1 研究问题的提出
    1.2 研究的目的与意义
    1.3 国内外研究综述
        1.3.1 非酒精性脂肪肝病
        1.3.2 NAFLD的脂质代谢机制
        1.3.3 NAFLD的免疫学机制
        1.3.4 Invariant Nature Kill T Cells—iNKT细胞
        1.3.5 NKT细胞与非酒精性脂肪肝病
    1.4 思路和方法
    1.5 研究内容
        1.5.1 NAFL和 NASH模型小鼠的建立及α-GalCer干预效果研究
        1.5.2 α-GalCer对 NAFL和 NASH模型小鼠免疫状态影响研究
        1.5.3 iNKT细胞调控肝脏脂质代谢和炎症的机制研究
        1.5.4 iNKT2 细胞过继输注调控NASH的研究
        1.5.5 iNKT2 细胞是否通过分泌IL-4 直接调节NAFLD
    1.6 创新点
第二章 NAFLD模型小鼠的建立及α-GalCer干预效果研究
    2.1 序言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 实验动物
        2.2.2 实验试剂
        2.2.3 主要仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 动物模型建立及处理
        2.3.2 葡萄糖耐量(GTT)及胰岛素抵抗(ITT)检测
        2.3.3 血清生化指标分析
        2.3.4 肝脏指数
        2.3.5 肝脏组织H&E染色
        2.3.6 肝脏组织学评分
        2.3.7 统计学处理
    2.4 实验结果
        2.4.1 NAFL小鼠体重升高,NASH小鼠体重降低。
        2.4.2 NAFL和 NASH小鼠均未产生葡萄糖耐受和胰岛素抵抗
        2.4.3 外周血生化指标变化
        2.4.4 肝脏外观及肝脏指数变化
        2.4.5 肝脏H&E染色及组织学评分
        2.4.6 肝脏脂质沉积和炎性状况评价
    2.5 讨论
第三章 α-GalCer调节NAFLD模型小鼠的免疫状态的研究
    3.1 序言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 实验动物
        3.2.2 实验试剂
        3.2.3 主要仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 外周血的采集和肝脏淋巴细胞悬液的制备
        3.3.2 小鼠外周血iNKT细胞频率检测
        3.3.3 小鼠肝脏iNKT细胞频率检测
        3.3.4 小鼠肝脏iNKT1/2 细胞频率的检测
        3.3.5 统计学处理
    3.4 实验结果
        3.4.1 α-GalCer干预的NASH小鼠外周血iNKT细胞频率升高
        3.4.2 α-GalCer干预的NAFL小鼠肝脏iNKT细胞频率升高,NASH小鼠肝脏iNKT细胞频率降低
        3.4.3 α-GalCer干预的NAFL小鼠肝脏以iNKT2 亚群为主,NASH小鼠肝脏以iNKT1亚群为主
    3.5 讨论
第四章 iNKT细胞调控肝脏脂质代谢和炎症的机制研究
    4.1 序言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 实验动物
        4.2.2 实验试剂
        4.2.3 主要仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 肝脏组织采集与处理
        4.3.2 Western Blot分析小鼠肝脏PPAR-α、SREBP-1c、NF-κB蛋白的表达水平
        4.3.3 统计学处理
    4.4 实验结果
        4.4.1 α-GalCer下调NAFL小鼠肝脏SREBP-1c蛋白表达和上调PPAR-α蛋白表达
        4.4.2 α-GalCer降低NASH小鼠肝脏SREBP-1c蛋白表达和抑制NF-κB蛋白的磷酸化
    4.5 讨论
第五章 iNKT2 细胞过继输注调控NASH的研究
    5.1 序言
    5.2 实验材料与方法
        5.2.1 实验动物
        5.2.2 实验试剂
        5.2.3 主要仪器
    5.3 实验方法
        5.3.1 iNKT2 细胞分离纯化
        5.3.2 iNKT2 细胞过继输注
        5.3.3 外周血生化指标检测
        5.3.4 肝脏组织H&E染色及脂质和炎性评分
        5.3.5 流式细胞术检测iNKT细胞频率及亚群
        5.3.6 统计学处理
    5.4 实验结果
        5.4.1 腹腔注射α-GalCer的小鼠脾脏分离纯化得到大量iNKT2 细胞
        5.4.2 iNKT2 细胞过继输注对NASH小鼠体重无明显影响
        5.4.3 iNKT2 细胞过继输注对NASH小鼠生化指标无影响
        5.4.4 iNKT2 细胞过继输注对肝脏脂质沉积和炎症无改善作用
        5.4.5 iNKT2 细胞过继输注小鼠外周血iNKT细胞频率无变化
        5.4.6 iNKT2 细胞过继输注小鼠的肝脏iNKT及 iNKT1 细胞频率升高
    5.5 讨论
第六章 IL-4对HepG2 细胞脂肪变性的干预研究
    6.1 序言
    6.2 实验材料与方法
        6.2.1 实验细胞
        6.2.2 实验试剂
        6.2.3 主要仪器
    6.3 实验方法
        6.3.1 HepG2 细胞的培养
        6.3.2 油酸钠(OA)和棕榈酸钠(PA)的溶解
        6.3.3 HepG2 细胞变性模型的建立及IL-4 处理
        6.3.4 油红O染色
    6.4 实验结果
    6.5 讨论
结论
研究不足与展望
参考文献
附表
致谢
攻读学位期间取得的研究成果



本文编号：3892566