反向杂交检测HBV耐药突变方法的建立及评估

发布时间：2024-02-02 19:08

　　乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)一直以来就威胁着全人类的健康,核苷(酸)类似物作为抗HBV感染的主要药物,在抑制病毒方面取得了不错的成果。但随着用药时间延长,HBV都会在不同程度上表现出耐药,严重制约后续药物的选择及其疗效,那么,早期监测耐药就显得至关重要。目前,多数HBV耐药突变检测技术限于实验研究,只有直接测序法,荧光定量PCR和线性探针分析法三种检测技术用于临床耐药分析。相对其他两种技术而言,基于反向杂交原理的线性探针分析法简便,快速,可以实现多位点检测,具有广阔的应用前景。拉米夫定,阿德福韦和恩替卡韦是最早应用于临床乙型肝炎治疗的药物,本研究就是利用反向杂交原理,建立一种同时检测HBV对这三种药物耐药的方法。为了优化反应条件,本研究还构建了HBV耐药标准株。随后,对已建立的反向杂交体系进行方法学评价和临床评估。 目的:构建HBV耐药标准株,利用野生和耐药标准株建立一种特异、灵敏地检测HBV对三种核苷(酸)类似物耐药的方法,并对确立的检测体系进行评估以便了解其可行性。 方法:1.以扩增得到的267bp的突变片段(rt169T, rt173L, rt18...

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【部分图文】：

图1-1HBV耐药标准株构建示意图

图1-1HBV耐药标准株构建示意图Fig.1-1SchematicdiagramofconstructionofHBVdrug-resistantstandardstrain.Note:Onlyattenresistantcodonpositi....

图1-3HBV耐药株消化前和消化后的电泳图谱

图1-4HBV耐药标准株与野生标准株的序列比对结果Fig.1-4AlignmentresultofHBVwild-typeanddrug-resistantstandardstrain.SequenceW:HBVwild-typestandar....

图1-4HBV耐药标准株与野生标准株的序列比对结果

物通过作用于HBVDNA聚合酶发挥抗病毒作用为四个功能域，其中逆转录酶区（reversetransc的关键区域，拉米夫定，阿德福韦和恩替卡韦耐别为：rtM204V/I[4],rtL180M和rtV173L/G[22,23]15S[25]；rtI169T，rtT184....

图2-1反向杂交原理的示意图

后复性带来的影响。研究发现，正向引物与反向引物的比例为1000：1，100：1，10：1和1：1时，PCR产物的杂交信号强度基本一致，说明不对称PCR确实提高了有效链的比例，但对特异性的改善不明显。3.增加地高辛的标记数目1)在PCR过程中掺入d-UTP：....

本文编号：3893016