CMKLR1过表达在大鼠非酒精性脂肪性肝炎脂肪组织中的作用及意义

发布时间：2017-05-24 10:16

  本文关键词：CMKLR1过表达在大鼠非酒精性脂肪性肝炎脂肪组织中的作用及意义，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:高脂饮食喂养的SD雄性大鼠为研究对象,观察慢病毒介导的CMKLR1过表达在SD大鼠非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)脂肪组织中的作用以及意义。方法:提前制作携带有大鼠趋化因子样受体1(chemokine-like receptor 1,CMKLR1)基因慢病毒载体的构建以及评定。雄性SD大鼠42只,在动物房适应饲养7天后,随机将所有大鼠分成四个组:?对照12只;?模型12只;?转染12只;④空转染6只,对照组普通饮食喂养,其余高脂肪含量饮食喂养。在实验第1天,对照及模型组于尾静脉注射磷酸盐缓冲液(phosphate-buffered saline,PBS)100ul,转染组于尾静脉注射病毒液100ul,空转染组于尾静脉注射空病毒液100ul。在实验第7、14、20天空转染组各取2只处死,评价转染效率。每周记录大鼠体重;实验第8、12周,各组随机取6只老鼠禁饮食12小时后,水合氯醛腹腔麻醉,迅速剪开腹腔,观察肝脏形态学变化,腹主动脉取血,取肾周脂肪组织,置液氮中冷冻,然后转移至-80℃冰箱冻存,保存肝组织行苏木精-伊红(hematoxylin and eosin staining,HE)染色;检测血中凯莫瑞、脂联素含量;RT-PCR法检测脂肪组织中CMKLR1、脂联素m RNA的含量;蛋白免疫印迹法测各组大鼠脂肪组织中CMKLR1和脂联素的蛋白含量。结果:(1)模型大鼠与同时期对照和转染大鼠体重及肝指数相比明显升高(P0.05)。(2)肝脏HE结果显示:对照组大鼠的肝细胞按一定的顺序排列、肝细胞条索结构清楚、放射状排列;模型组8周出现了单纯性脂肪肝,肝细胞体积变大,肝细胞紊乱排列,未见肝窦出现,肝小叶周边的肝脏细胞呈现局灶脂肪变性的表现;12周呈现了肝脏重度脂肪肝,视线内绝大多数的肝细胞呈现大泡脂滴为主的混合脂肪变改变,可以看到炎性细胞的出现及点状坏死,已发展到NASH;转染组较同期模型大鼠病理程度减轻,与对照组接近。(3)模型组比同期对照组大鼠血清中凯莫瑞水平上升(P0.05),转染组比同期模型组血清中凯莫瑞水平上升(P0.05)。(4)8周时模型组比同期对照大鼠循环血中脂联素水平降低(P0.05),12周时进一步降低,转染组较同期模型组循环血中脂联素水平上升。(5)PCR提示,同时期的模型组与对照组相比,脂肪组织中CMKLR1 m RNA含量上升(P0.05),转染组比同期模型大鼠CMKLR1 m RNA含量明显增多(P0.05);模型组与同期对照组相比脂肪组织中脂联素m RNA含量下降,转染组比同期模型组相比增多(P0.05)。(6)蛋白免疫印迹结果提示,同时期的模型组与对照组大鼠相比,脂肪组织中CMKLR1蛋白含量上升(P0.05),转染组与同期模型组相比含量明显增加(P0.05);模型组大鼠与同时期对照组相比脂肪组织脂联素蛋白含量表达下降,转染组与同时期模型大鼠相比明显增高(P0.05)。结论:用高脂肪含量的饲料喂养12周成功创建了SD大鼠非酒精性脂肪性肝炎的模型;慢病毒介导的大鼠脂肪组织中CMKLR1过表达可显著改善SD大鼠非酒精性脂肪性肝炎时肝组织学改变。
【关键词】：非酒精性脂肪性肝炎 趋化因子样受体1 凯莫瑞 脂联素
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575.1
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 常用缩写词中英文对照表10-11
• 前言11-13
• 1 材料与方法13-18
• 1.1 实验动物13
• 1.2 动物分组及处理13
• 1.3 指标检测的主要试剂、仪器和方法13-17
• 1.4 统计学方法17-18
• 2 结果18-21
• 2.1 大鼠体重、肝指数的变化18
• 2.2 大鼠肝组织形态学变化18
• 2.3 大鼠血清中凯莫瑞、脂联素变化18-19
• 2.4 大鼠脂肪组织中CMKLR1、脂联素基因的表达变化19
• 2.5 大鼠脂肪组织中CMKLR1、脂联素蛋白含量的变化19-21
• 3 讨论21-25
• 3.1 非酒精性脂肪性肝炎动物模型的建立21
• 3.2 CMKLR1 过表达在大鼠NASH时脂肪组织中的作用及意义21-25
• 4 结论25-26
• 参考文献26-29
• 综述29-34
• 参考文献32-34
• 附图34-38
• 致谢38-39
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果39-40
• 个人简历40

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 吴静;卢慧玲;胡秀芬;梁晓燕;林汉华;王宏伟;;3T3-L1前脂肪细胞烟碱样胆碱能受体α7亚型功能状态对chemerin及其受体chemerinR基因表达的影响[J];中国动脉硬化杂志;2008年06期

2 段晓燕;范建高;;2010欧洲肝病学会非酒精性脂肪性肝病专家共识简介[J];中国医学前沿杂志(电子版);2012年07期

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本文编号：390479