过表达葡萄糖转运蛋白-2基因的INS-1细胞构建研究

发布时间：2024-02-28 05:56

　　研究目的: 慢性胰腺炎患者由于反复的炎症刺激,致胰岛β细胞损伤逐渐加重,β细胞数目明显减少,胰岛功能显著下降;同时长期高糖毒性作用亦可引起胰腺炎的反复发作,进一步加速胰岛β细胞凋亡,从而最终发展为继发性糖尿病。因此,控制高血糖是慢性胰腺炎后期治疗的一个重要环节,而目前的治疗方法尚存在诸多弊端。传统的体外胰岛素注射治疗,由于与胰岛素分泌的生理模式不符,易致血糖波动而引起相关并发症。细胞移植治疗虽为研究热点,但胰岛β细胞分离与储存技术难度较大、代价昂贵,因此寻找新的移植细胞来源是该方法亟需解决的关键难题。本课题应用逆转录病毒载体将调节胰岛素分泌的葡萄糖传感器——葡萄糖转运蛋白-2(glucose transporter-2, GLUT-2)基因转染于INS-1细胞,使INS-1细胞的胰岛素分泌更接近于生理条件,从而建成新型的“胰岛代理细胞”系,为细胞移植治疗提供新的、易供的移植细胞来源。 研究背景: 1、INS-1细胞源于辐射诱导的胰岛β细胞瘤,胰岛素含量为8μg/106细胞,超过80代仍可稳定表达,其胰岛素含量与原代培养的胰岛β细胞相似,同时该细胞自身无分泌胰高血糖素与生长抑素,更有助于...

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-2质粒pLXSN图谱

Figure2-1MapofpcB7/GLUT2图2-1质粒pcB7/GLUT2图谱载体pLXSN：购自美国Clontech公司。其多克隆位点有LTR启动子、新霉素抗性基因Neo及氨苄青抗性

图2-3pLXSN的包装

组质粒酶切鉴定：抽提取的pL-GLUT2-SN质粒用E应体系如下)。在37℃水浴反应3h，予3μL电泳加胶电泳，紫外灯下观察电泳结果拍照记录。粒EcoRIBamHIBufferddH2O0.2μL0.2μL1μL4.6μL组质粒的测序鉴定：由大连宝生....

图2-4瞬时与稳定的pLXSN转导

Figure2-4OverviewoftransientandstablepLXSNtransfection图2-4瞬时与稳定的pLXSN转导装细胞PA317培养FBS的RPMI1640培养基，37℃、5%CO2培养箱中培养L；A：4×10-7....

图2-6：GLUT-2序列比对结果

M1：λ-HindⅢ；M2：DL2000；1：pL-GLUT2-SN/EcoRⅠ+BamHⅠFigure2-5：RestrictionendonucleaseanalysisofpL-GLUT2-SN图2-5：pL-GLUT2-SN酶切鉴定1.2pL-G....

本文编号：3913570