UⅡ/UT受体系统在LPS刺激大鼠原代肝枯否细胞前炎细胞因子表达中的作用

发布时间：2024-02-28 18:37

　　目的：分离培养原代肝枯否细胞(kupffer cell, KC),并探讨urotensin II (UII)及其受体(UT)在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激KC前炎细胞因子表达中的作用。方法：采用在体原位灌注、密度梯度离心和早期细胞换液等方法分离纯化大鼠KC,并采用墨汁吞噬和ED2染色试验对分离培养的细胞进行鉴定。采用LPS刺激肝KC。按照处理方式将细胞分为四组：A组：正常对照；B组：urantide;C组：LPS：D组：urantide+LPS。细胞UII及UT mRNA表达采用real-time PCR检测,培养上清液UII多肽的表达采用酶联免疫技术(ELISA)检测；细胞TNF-a和IL-1p表达与分泌分别采用RT-PCR和ELISA检测。结果：成功分离和纯化大鼠肝KC,并经墨汁吞噬和ED2染色试验鉴定证实；经统计学处理,原代肝KC的UII mRNA相对表达水平,C组显著高于A、B及D组[(14.785±1.441)比1、(0.926±0.263)、(4.069±0.575),均P<0.01],D组高于A组及B组(均Jp<0.01),而A...

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【部分图文】：

图３．１枯否细胞显微镜下表现??Ａ：分离后４ｈ的枯否细胞（Ｘ２００）：?Ｂ：分离后４ｈ的枯否细胞（Ｘ１００）

原代分离培养的ＫＣ形态可随培养时间延长，出现明显变化。这一点与原代??肝实质细胞有明显不同。初分离的ＫＣ镜下呈折光性很强的圆球形，培养３０?ｍｉｎ??后即逐渐贴壁，呈扁圆形（图３．１）。培养４ｈ的ＫＣ已牢固贴壁，并呈不规则形??状，部分已伸出伪足。随着培养时间的延长，细胞伸出的伪....

图３．２枯否细胞呑隨墨汁后的表现??Ａ；枯否细胞吞喧墨汁４ｈ后的表现（Ｘ２００）；?Ｂ：枯否细胞吞隨墨汁化后的表现（Ｘ２００）

图中箭头所示可见枯否细胞吞晚了大量的墨汁。??３３?ＥＤ２染色结果??图３．３为ＫＣ免疫细胞化学染色结果。图中可见许多细胞被染成了黄褐色。??由于大部分ＫＣ表达ＣＤ１６３，经ＥＤ２染色后，细胞可被染成黄褐色。通过该项??染色方法，可十分准确地将ＫＣ鉴定出来。该结果提示我们已成功分....

图３．３?ＫＣ免疫细胞化学染色表现（ＥＤ２染色）??Ａ；?ＥＤ２?染色（Ｘ４００）；?Ｂ：阴性对照（Ｘ４００）

Ａ；?ＥＤ２?染色（Ｘ４００）；?Ｂ：阴性对照（Ｘ４００）。??３．４原代枯否细胞ＵＩＩ和ＵＴ?ｍＲＮＡ的表达情况??各组大鼠肝枯否细胞ＵＩＩ和ＵＴ?ｍＲＮＡ的相对表达量见图３．４。经统计学处??理，原代肝ＫＣ的ＵＩＩ?ｍＲＮＡ相对表达水平Ｃ组显著高于Ａ、Ｂ及Ｄ组??［（１４．７....

图３．４原代枯否细胞ＵＩ！和ＵＴ?ｍＲＮＡ表达情况（ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣ民）??＊＊糾

＜０．０１?ｖｓ?Ｃ?组??３．５细胞培养上清液ＵＩＩ多化的水平??大鼠ＫＣ细胞培养上清液中ＵＩＩ蛋白分泌水平如图３．５。经统计学处理，原??代细胞培养上清液ＵＩＩ多肤分泌水平，Ｃ组显著高于Ａ、Ｂ及Ｄ组??［（３５４．４８５±１０．６５８）?ｐｇ／ｍＬ?比（２０２．２４±５．４２....

本文编号：3913863