miR-21通过抑制PTEN/PI3K/AKT信号通路减轻小鼠肝细胞缺氧/复氧损伤

发布时间：2024-03-01 20:22

　　目的探讨体外实验中miR-21对C57BL/6J小鼠原代肝细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的影响及其可能的分子机制。方法建立体外原代培养肝细胞H/R模型,采用实时定量PCR检测miR-21的表达;Western blot法检测肝细胞中第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、Bcl-2、Bax的蛋白表达水平;流式细胞术检测肝细胞凋亡。结果原代培养肝细胞在H/R处理后miR-21表达下调;而外源性miR-21模拟物处理的肝细胞经H/R后PTEN表达降低、p-AKT表达升高、Bcl-2表达水平及Bcl-2/Bax比值升高,肝细胞凋亡减少,而抑制AKT磷酸化可导致肝细胞Bcl-2表达水平及Bcl-2/Bax比值降低,肝细胞凋亡增加。结论 miR-21可通过抑制PTEN/PI3K/AKT信号通路减轻H/R导致的肝细胞凋亡,减轻H/R过程中肝细胞的损伤。

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 小鼠原代肝细胞提取
        1.2.2 细胞分组及转染
        1.2.3 实时荧光定量PCR检测肝细胞mi R-21水平
        1.2.4 流式细胞术检测肝细胞凋亡
        1.2.5 Western blot法检测肝细胞PTEN、AKT、p-AKT、Bcl-2、Bax蛋白水平
        1.2.6 统计学分析
2 结果
    2.1 细胞转染agomi R-21后其表达水平明显升高
    2.2 过表达mi R-21减轻H/R介导的肝细胞凋亡
    2.3 过表达mi R-21抑制PTEN表达,促进PI3K/AKT磷酸化
    2.4 过表达mi R-21调控凋亡相关蛋白表达
    2.5 抑制PI3K表达可降低mi R-21的抗细胞凋亡作用
    2.6 抑制PI3K可降低AKT磷酸化水平
    2.7 抑制PI3K后肝细胞Bcl-2表达减少,Bcl-2/Bax比值降低
3 讨论



本文编号：3915784