MiR-223/中性粒细胞颗粒蛋白信号轴调控NASH相关肝纤维化的功能和机制研究

发布时间：2024-04-02 03:05

　　一、研究背景非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)包括肝细胞单纯性脂肪变、非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis,NASH)及由其进展的肝纤维化和肝硬化[1]。由于肥胖和代谢综合症发病率快速增加,NAFLD成为全世界范围内最主要的慢性肝病之一。与单纯性脂肪变相比,NASH患者进展为终末期肝病的风险显著增加。目前,NASH发生及发展为肝纤维化的分子机制尚未阐明,尚无特异性治疗NASH及NASH相关肝纤维化的药物。临床及动物研究结果已证实,肝组织中性粒细胞浸润增强是NASH的重要组织病理学特征之一[1]。中性粒细胞颗粒蛋白是中性粒细胞发挥免疫调控作用的重要因子。Micro RNA-223(miR-223)是一种在中性粒细胞中具有高丰度的micro RNA,其在多种炎症状态下调节中性粒细胞的活化及炎性反应。研究miR-223及中性粒细胞颗粒蛋白调控NASH相关肝纤维化的功能和分子机制对于深入揭示NASH进展为肝纤维化的关键病理生理机制以及发现药物研发的新型、潜在靶点具有重要科学意义。二、研究目的...

【文章页数】：126 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 NASH相关的肝脏炎症及肝纤维化
        1.1.1 NASH的概念及流行病学特征
        1.1.2 组织病理学特征及诊断标准
        1.1.3 发病机制
    1.2 中性粒细胞与肝脏天然免疫反应、肝脏代谢性炎症及其纤维化
        1.2.1 中性粒细胞概述
        1.2.2 中性粒细胞与肝脏天然免疫反应
        1.2.3 中性粒细胞分泌的天然免疫介导因子
        1.2.4 中性粒细胞在NASH相关的肝脏炎症及肝纤维化过程中发挥重要的生物学功能
    1.3 MiR-223与中性粒细胞功能、肝脏代谢性炎症及肝纤维化
        1.3.1 Micro RNA及 miR-223 概述
        1.3.2 MiR-223调节中性粒细胞功能
        1.3.3 MiR-223在肝脏代谢性炎症及纤维化过程中发挥重要功能
    1.4 拟解决科学问题及研究意义
    1.5 研究策略
第二章 实验方法、实验材料及仪器设备
    2.1 实验方法
        2.1.1 动物来源及饲养环境
        2.1.2 样品收集
        2.1.3 样品处理
        2.1.4 病理学检测
        2.1.5 蛋白检测
        2.1.6 核酸检测
        2.1.7 生化检测
        2.1.8 肝非实质细胞(non-parenchymal cell,NPC)的分离
        2.1.9 原代中性粒细胞分离、骨髓细胞分离
        2.1.10 双荧光素酶报告基因检测
    2.2 实验材料
        2.2.1 饲料
        2.2.2 化学试剂
        2.2.3 抗体
        2.2.4 引物
    2.3 仪器设备
    2.4 溶液配方
第三章 NASH相关肝纤维化动物模型的诱导与评价
    3.1 引言
        3.1.1 NAFLD实验动物模型研究的现状与挑战
        3.1.2 NAFLD理想动物模型的标准
        3.1.3 目前NASH的动物模型及其优势和局限
        3.1.4 研究目标与对策
    3.2 NASH相关肝纤维化模型的诱导方案及结果
        3.2.1 模型诱导方案
        3.2.2 模型诱导结果
    3.3 本章小结
第四章 MiR-223 介导NASH相关肝纤维化的病理生理学功能研究
    4.1 引言
    4.2 MiR-223 的肝内丰度在CDAHFD饮食饲喂小鼠中显著升高
    4.3 成功获得miR-223 敲除(miR-223 KO或 miR-223-/-)小鼠
    4.4 MiR-223 缺失对CDAHFD饮食诱导的NASH肝脏炎症及其相关肝纤维化的影响
        4.4.1 实验方案
        4.4.2 检测结果
    4.5 小结
第五章 MiR-223调控中性粒细胞肝脏浸润及其介导的炎症反应的功能研究
    5.1 引言
    5.2 MiR-223 缺失显著增加CDAHFD饮食诱导小鼠中性粒细胞的肝脏浸润
    5.3 MiR-223缺失导致中性粒细胞迁移能力增强
    5.4 MiR-223 缺失显著增加CDAHFD饮食诱导小鼠肝脏中性粒细胞颗粒蛋白的表达
    5.5 多种祛湿化浊中药可抑制免疫细胞中促炎性因子及颗粒蛋白的表达
    5.6 小结
第六章 MiR-223调控中性粒细胞颗粒蛋白表达的关键转录因子鉴定
    6.1 引言
    6.2 技术路线
    6.3 MiR-223调控中性粒细胞颗粒蛋白的关键转录因子的转录组结果
    6.4 MiR-223调控中性粒细胞颗粒蛋白的关键转录因子的转录组测序结果的验证
    6.5 双荧光素酶报告基因方法检测miR-223与转录因子的相互作用
        6.5.1 实验方案
        6.5.2 实验结果
    6.6 MiR-223通过调控转录因子影响中性粒细胞颗粒蛋白的表达
    6.7 小结
第七章 髓系细胞来源的miR-223在NASH相关肝纤维化中发挥重要功能
    7.1 引言
    7.2 骨髓嵌合型小鼠的获得及NASH相关肝纤维化模型诱导
    7.3 野生型小鼠骨髓细胞嵌合改变miR-223 敲除小鼠经CDAHFD饮食诱导的NASH肝脏炎症及其相关肝纤维化
        7.3.1 野生型小鼠骨髓细胞嵌合改变miR-223 敲除小鼠经CDAHFD饮食诱导的NASH组织病理学特征
        7.3.2 野生型小鼠骨髓细胞嵌合改变miR-223 敲除小鼠经CDAHFD饮食诱导的肝纤维化
        7.3.3 野生型小鼠骨髓细胞嵌合改变miR-223 敲除小鼠经CDAHFD饮食诱导的肝损伤
    7.4 野生型小鼠骨髓细胞嵌合不影响miR-223 敲除小鼠CDAHFD饮食诱导的肥胖代谢表型
    7.5 小结
第八章 结论与展望
    8.1 结论
    8.2 展望
参考文献
附录 缩略词
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文



本文编号：3945715