β1，6N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V调控肝纤维化的机制研究

发布时间：2024-05-19 08:44

　　肝纤维化是多种肝病共同病理过程,肝星状细胞激活则是导致肝脏纤维化发生的关键步骤。近年来的研究发现糖基化修饰在肝纤维化发生过程中发生了特异性的改变,有望成为新的肝纤维化治疗靶点。其中一种重要的限速酶——β1,6N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V (N-acetylglucosaminyltransferase V,GnT-V)通过改变糖基化修饰调控肿瘤发生的作用已经有所报道,然而GnT-V在肝纤维发生过程中的作用机制尚未明确。本论文的研究发现在硫代乙酰胺(TAA)诱导的小鼠肝纤维化模型中,肝组织的GnT-V表达水平显著上调,而尾静脉注射重组腺病毒载体表达靶向GnT-V的小干扰RNA,可以显著减低肝组织GnT-V的表达水平并抑制TAA诱导的小鼠肝纤维化。体外实验则发现下调大鼠肝星状细胞中GnT-V的表达水平能有效抑制肝星状细胞的激活、增殖和迁移,减弱与上述过程密切相关的星状细胞TGF-p/Smad和PDGF/Erk信号通路。免疫沉淀的结果也表明下调星状细胞的GnT-V表达水平降低了TGF-p受体的N-型糖基化程度。我们还发现下调体外培养小鼠肝细胞的GnT-V表达水平能有效抑制肝细胞EMT过程的发生...

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
综述部分
    一、肝纤维化的研究进展
        1 肝纤维化简介
        2 肝纤维化发生的机理
            2.1 肝脏构造
            2.2 肝纤维化发生机理
        3 肝细胞上皮间质转化在肝纤维化发生过程中的作用
        4 肝纤维化动物模型
            4.1 化学药物或毒物所致肝纤维化实验动物模型
            4.2 胆管阻塞性肝纤维化模型(bile duct ligation,BDL)
            4.3 慢性酒精中毒性肝纤维化动物模型
            4.4 免疫法建立肝纤维化模型
            4.5 营养性肝纤维化动物模型
    二、肝星状细胞在肝纤维化发生过程中的作用机制
        1 肝星状细胞的功能
        2 与肝星状细胞激活有关的信号通路
            2.1 PDGF/Erk信号通路
            2.2 TGF-β/Smad信号通路
            2.3 肝星状细胞参与免疫应答反应
    三、糖基化在肝纤维化发生过程中的作用机制
        1 β1,6 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(β1,6 N-aeetylglucosaminyltransferase,GnT-V)在糖基化修饰中的作用
        2 糖基化与肝纤维化的关系
    参考文献
实验部分
    一、引言
    二、实验仪器和材料
        1 实验仪器
        2 实验材料
    三、实验方法
        1 TAA诱导的小鼠肝纤维化模型
        2 重组腺病毒载体的构建
        3 细胞流式分析
        4 HSC-T6增殖速度检测
        5 细胞侵袭实验
        6 细胞划痕实验
        7 肝脏羟脯氨酸含量及血清转氨酶活性的测定
        8 肝脏组织HE染色、天狼星红染色、免疫组化及免疫荧光染色
            8.1 组织的包埋与切片
            8.2 组织切片的HE染色
            8.3 组织切片的天狼星红染色
            8.4 组织切片的免疫组织化学染色
            8.5 组织切片的免疫荧光染色
        9 Western-blot
            9.1 细胞蛋白提取
            9.2 组织蛋白提取
            9.3 制胶
            9.4 转膜(湿法)
            9.5 免疫标记及显影
        10 免疫共沉淀
        11 RNA提取及Q-PCR
            11.1 细胞RNA的提取
            11.2 组织RNA的提取
            11.3 逆转录体系(20μL)TaKaRa试剂盒
            11.4 Q-PCR体系(20μL)TaKaRa试剂盒
    四、实验结果
        1 GnT-V表达水平在肝纤维化发生过程中的变化
        2 构建能高效表达GnT-V shRNA的重组腺病毒
        3 下调GnT-V表达水平对肝星状细胞活化程度的影响
        4 下调小鼠肝组织GnT-V表达能有效抑制肝纤维化发生
        5 HSC细胞GnT-V表达水平对TGF β受体N-型糖基化修饰和TGF-β／Smad信号通路的影响
        6 下调GnT-V表达对PDGF诱导的肝星状细胞增殖和迁移及PDGF/Erk信号通路的作用
        7 GnT-V调控肝细胞上皮间质转化(EMT)的作用研究
    五、小结及讨论
致谢



本文编号：3977873