SHP2对体外活化肝星状细胞凋亡的影响

发布时间：2024-05-21 05:22

　　目的探讨含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(src-homology domain 2-containing protein tyrosine phosphatase 2,SHP2)对体外活化肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)凋亡的影响。方法通过反复感染AD293细胞,扩增携带野生型SHP2(PTPN11)基因并表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组腺病毒Ad-SHP2、携带靶向SHP2的RNA干扰序列[短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)]并表达GFP的重组腺病毒Ad-shRNA/SHP2及仅表达GFP的对照空病毒Ad-GFP;体外培养人肝星状细胞系LX-2,将重组腺病毒Ad-SHP2、Ad-shRNA/SHP2及对照空病毒Ad-GFP分别转染LX-2细胞;应用实时荧光定量PCR技术检测活化HSC的SHP2 mRNA表达;应用Western blot技术检测活化HSC的SHP2、Bax、Bcl-2蛋白表达;采用末段脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末段标记(terminal ...

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
英文缩略表
引言
第1章 实验研究
    1.1 实验材料
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 重组腺病毒
        1.1.3 主要试剂
        1.1.4 主要试剂配制
        1.1.5 主要实验仪器
    1.2 实验方法
        1.2.1 细胞培养
        1.2.2 腺病毒扩增及滴度测定
        1.2.3 腺病毒转染体外活化HSC
        1.2.4 Westernblot实验检测体外活化HSC的 SHP2、Bax、Bcl-2 蛋白表达
        1.2.5 实时荧光定量PCR技术检测体外活化HSC的 SHP2表达
        1.2.6 TUNEL法检测体外活化HSC凋亡
        1.2.7 膜联蛋白-V及碘化丙啶双标记流式细胞术检测体外活化HSC凋亡
        1.2.8 统计学方法
    1.3 实验结果
        1.3.1 腺病毒扩增
        1.3.2 腺病毒滴度
        1.3.3 腺病毒转染HSC的转染效率
        1.3.4 体外活化肝星状细胞的SHP2过表达及低表达模型成功构建
        1.3.5 TUNEL法检测体外活化HSC凋亡
        1.3.6 膜联蛋白-V及碘化丙啶双标记流式细胞术检测HSC凋亡
        1.3.7 SHP2表达变化对体外活化HSCBax表达的影响
        1.3.8 SHP2表达变化对体外活化HSCBcl-2 表达的影响
    1.4 讨论
        1.4.1 SHP2对肿瘤细胞凋亡的影响
        1.4.2 SHP2表达变化对体外活化肝星状细胞凋亡的影响
        1.4.3 SHP2影响体外活化肝星状细胞凋亡的可能机制
    1.5 结论
    参考文献
第2章 综述 SHP2与肝脏疾病研究进展
    2.1 SHP2的结构及活性调节
    2.2 SHP2的生物学功能及参与的信号传导通路
        2.2.1 SHP2的生物学功能
        2.2.2 SHP2参与的信号传导通路
    2.3 SHP2与肝细胞癌
    2.4 SHP2与非肿瘤性肝脏疾病
    2.5 结语
    参考文献
结论
致谢
导师简介
作者简介
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本文编号：3979664