利用CD11c-DTR小鼠研究肠道巨噬细胞在DSS诱导的急性结肠炎中的作用

发布时间：2017-05-28 11:12

  本文关键词：利用CD11c-DTR小鼠研究肠道巨噬细胞在DSS诱导的急性结肠炎中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:溃疡性结肠炎(UC)是一种病因和发病机理尚不十分清楚的慢性肠道炎症性疾病。研究发现活动性UC患者的大肠炎症中巨噬细胞的数量明显增,巨噬细胞还分泌大量的细胞因子及生物活性物质,在炎症反应中发挥重要的作用。给CD11c-DTR小鼠腹腔注射DT(白喉毒素),可以完全清除肠道巨噬细胞和树突状细胞,而巨噬细胞和树突状细胞在肠道重新发育回来存在时间窗口期。DT注射后3天后树突状细胞优先发育回来,两周后巨噬细胞才能在肠道中发育回来。利用这种方法我们可以在体内研究巨噬细胞缺失对DSS(葡聚糖硫酸钠)诱导的急性结肠炎的发生发展产生怎样的作用。方法:1流式检测CD11c-DTR小鼠腹腔注射DT后巨噬细胞和树突状细胞在肠道中发育回归窗口期流式细胞术检测CD11c-DTR小鼠注射DT后不同时间点(1d、3d、1w、2w)大肠固有层巨噬细胞(IA/IE+F4/80+)和树突状细胞(CD11c+CD11b+)的数量和比例的变化情况。2建立C57BL/6小鼠DSS诱导的急性结肠炎模型据Cooper等的方法,建立急性DSS诱导的小鼠结肠炎模型:将分子量为5000的DSS溶于蒸馏水,配制成5%的DSS溶液,使C57BL/6小鼠自由饮用7天,建立小鼠急性结肠炎模型。3检测巨噬细胞在DSS诱导的C57BL/6小鼠急性结肠炎中的作用流式检测DSS诱导的C57BL/6小鼠急性结肠炎中大肠固有层巨噬细胞(IA/IE+F4/80+)比例和数量的变化。免疫组化检测DSS诱导的急性结肠炎中大肠固有层巨噬细胞(IA/IE+F4/80+)数量的变化。采用RealTime PCR、ELISA方法,检测DSS诱导的急性结肠炎直肠组织相关细胞因子分泌情况。4检测CD11c-DTR小鼠DT窗口期(巨噬细胞缺失)DSS诱导急性结肠炎免疫病理变化用5%的dss溶液诱导窗口期小鼠(cd11c-dtr小鼠腹腔注射dt后第7~14d)建立小鼠急性结肠炎模型。流式细胞术、he染色观察在肠道巨噬细胞缺失的情况下dss诱导急性结肠炎发生发展情况。用real-timepcr、elisa为辅助手段,检测在肠道巨噬细胞缺失的情况下dss诱导的急性结肠炎直肠组织相关细胞因子分泌情况。结果:1cd11c-dtr小鼠在腹腔注射dt巨噬细胞和树突状细胞发育回归存在窗口期:cd11c-dtr小鼠在腹腔注射dt(200ng/只)1天后,巨噬细胞和树突状细胞完全清除;cd11c-dtr小鼠在腹腔注射dt(200ng/只)3天后树突状细胞比例有所上升,但并没有恢复到正常水平,巨噬细胞仍然处于完全清除状态;cd11c-dtr小鼠在腹腔注射dt(200ng/只)7天后树突细胞比例完全恢复到正常状态,巨噬细胞仍然处于完全清除状态;cd11c-dtr小鼠在腹腔注射dt(200ng/只)14天后,树突细胞比例完全恢复到正常状态,巨噬细胞仍然处于完全清除状态。2dss诱导急性结肠炎模型成功:使c57bl/6小鼠自由饮用5%dss溶液,模型组第3~4天开始出现急性结肠炎症状,体重下降、粪便松散、隐血试验阳性最早出现于第3天,稀便和血便最早出现于第4天,粪便含水量在第3~4天开始明显增加,实验结束小鼠体重下降约50%左右,较对照组有明显统计学差异;第8天取全段结肠,模型组小鼠的结肠长度较对照组短,有差异有统计学差异;取第8天全段结肠,he染色,全段光镜下模型组表现为部分上皮脱落,炎症细胞亲润,上皮内杯状细胞减少,病理学炎症评分较对照组有明显统计学差异。3dss诱导急性结肠炎模型中巨噬细胞数量明显增加:流式结果显示,c57bl/6小鼠dss诱导急性结肠炎模型第7天大肠固有层巨噬细胞(ia/ie+f4/80+)比例和数量明显上升,较对照组有明显差异。免疫组化检测dss诱导的急性结肠炎第7天大肠固有层巨噬细胞(ia/ie+f4/80+)数量明显上升,较对照组有明显差异。4肠道巨噬细胞缺失,结肠炎明显减轻:cd11c-dtr小鼠腹腔注射dt第7天,dss诱导急性结肠炎模型。cd11c-dtr窗口期小鼠模型组较wt(野生型)模型组小鼠临床症状减轻。cd11c-dtr窗口期小鼠模型组较WT(野生型)模型组小鼠病理学炎症评分及HE炎症评分均有明显统计学差异。结论:成功找到CD11c-DTR小鼠腹腔注射DT巨噬细胞和树突状细胞发育回归存在的窗口期,并利用此窗口期研究DSS诱导的急性结肠炎中巨噬细胞的作用。发现在DSS诱导的结肠炎模型中,巨噬细胞缺失会减轻小鼠结肠炎症状态,显示巨噬细胞在DSS诱导的结肠炎模型中起着促进炎症发生发展的作用。
【关键词】：巨噬细胞 炎症性肠病 CD11c-DTR小鼠 葡聚糖硫酸钠(DDS) 流式细胞术 HE染色 免疫组化 酶联免疫吸附测定
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R574.62
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文缩写11-12
• 前言12-13
• 材料与方法13-22
• 结果22-26
• 附图26-33
• 附表33-34
• 讨论34-35
• 结论35-36
• 参考文献36-38
• 综述 肠道树突状细胞亚群分类进展38-48
• 参考文献42-48
• 致谢48-49
• 个人简历49

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本文编号：402533