miR-146a调控Toll-like recetor4信号通路在肠缺血及缺血再灌注损伤中的作用及机制研究

发布时间：2017-06-01 05:13

  本文关键词：miR-146a调控Toll-like recetor4信号通路在肠缺血及缺血再灌注损伤中的作用及机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:在体外模拟肠缺血及缺血再灌注,探讨miR-146a及TLR4-TRAF6-NF-κB通路在其中的作用情况,为肠缺血的早期诊断及缺血相关性损伤之治疗提供理论基础。方法:利用大鼠肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IEC-6),分别以1h、2h、3h建立不同时间缺血模型(I1h、I2h、I3h),以缺血1h再灌注1h建立缺血再灌注模型(I1hR1h),再在I1h组及I1hR1h组中调控miR-146a的表达,利用实时定量PCR检测各组mi R-146a、TLR4、TRAF6、RIP、XIAP的mRNA表达水平,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western-Blot检测HIF-1α、TLR4、TRAF6、RIP、XIAP、SCOS-3、NF-κB、cleaved-Caspase-3蛋白表达。实验数据采用SPSS 13.0统计软件进行统计分析,两样本均数比较采用t检验,多样本均数多重比较采用单因素方差分析,P0.05为差异有统计学意义。结果:(1)HIF-1α在缺血时表达显著增加(P0.01),再灌注处理后其表达下调,迅速趋于正常水平。(2)肠缺血患者血浆中,miR-146a的表达显著下降(P0.01)。(3)缺血1h后miR-146a的表达显著降低(P0.01),以后随着缺血时间的延长而缓慢恢复,但始终低于正常;I1hR1h组的miR-146a水平高于I1h组(P0.05),但仍显著低于正常(P0.05)。(4)细胞在缺血1h、2h、3h情况下的凋亡率会随着缺血时间的延长而逐渐升高,但缺血2h时与缺血3h时比较无统计学意义;I1hR1h组的凋亡率较I1h组更高(P0.05)。(5)在tlr4、traf6、rip的mrna水平与tlr4、traf6、rip、nf-κb、cleaved-caspase-3的蛋白水平中,具有相似的变化趋势,都是在缺血及缺血再灌注中显著升高(p0.05),其中在缺血1h时升高得最明显(p0.01),以后随着缺血时间的延长及再灌注的发生较在i1h组的基础上有所下降,但始终高于正常(p0.05);xiap的mrna水平与scos-3、xiap的蛋白水平变化中,都是在缺血1h时显著下降(p0.01),以后随着缺血时间的延长或再灌注的发生略有恢复,但始终低于正常(p0.05)。(6)在正常对照组中给予mir-146a的mimic或inhibitor处理后,可显著上调或下调mir-146a的表达(p0.01),但对细胞凋亡率无明显改变,无统计学意义。(7)在i1h组中,用mir-146a的mimic处理后,mir-146a的水平显著升高(p0.01);而用mir-146a的inhibitor处理过后,mir-146a下降趋势不明显,无统计学意义。(8)在i1hr1h组中,给予mir-146a的mimic或inhibitor处理后,可显著上调或下调mir-146a的表达水平(p0.05)。(9)在i1h组及i1hr1h组中,用mir-146a的mimic处理,显著上调mir-146a的表达水平后,tlr4、traf6、rip、nf-κb、cleaved-caspase-3的上调被抑制,而socs-3及xiap的上调被促进,各自与单纯i1h组、i1hr1h组比较具有明显差异(p0.05),细胞凋亡率下降,说明mir-146a抑制细胞凋亡起保护作用。(10)在i1hr1h组中,用mir-146a的inhibitor处理,下调mir-146a的表达水平后,tlr4、traf6、rip、nf-κb、cleaved-caspase-3表达上调,而socs-3及xiap表达下调,与单纯i1hr1h组相比具有明显差异(p0.05),细胞凋亡率增加,说明抑制mir-146a过后加剧细胞凋亡起损伤作用。结论:(1)miR-146a参与肠缺血及缺血再灌注过程,血浆miR-146a可望成为临床早期诊断小肠缺血的生物学标志;(2)TLR4-TRAF6-NF-κB信号通路参与肠缺血及缺血再灌注过程,介导细胞损伤;(3)miR-146a通过负调控TLR4-TRAF6-NF-κB信号通路抑制细胞凋亡,从而在肠缺血及缺血再灌注过程中起保护作用;(4)上调miR-146a或抑制TLR4-TRAF6-NF-κB通路的激活有望成为预防并治疗肠缺血相关性疾病的有效靶点。
【关键词】：肠缺血 肠缺血再灌注 TLR4 miR-146a 凋亡
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R574
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-16
• 材料与方法16-36
• 实验结果36-51
• 讨论51-69
• 结论69-70
• 参考文献70-78
• 英汉缩略词对照表78-80
• 致谢80-82
• Toll样受体4与肠缺血再灌注损伤关系研究进展（综述）82-99
• 参考文献90-99
• 攻读硕士期间发表的论文99-100

【共引文献】

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本文编号：411762