S-烯丙基半胱氨酸对大鼠非酒精性脂肪肝的影响以及机制研究

发布时间：2017-06-15 11:01

  本文关键词：S-烯丙基半胱氨酸对大鼠非酒精性脂肪肝的影响以及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的: 研究大蒜中的主要成分S-烯丙基半胱氨酸(S-allylcysteine, SAC)对非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)大鼠的肝保护作用，并对其可能的作用机制进行探讨。 方法: 1.动物实验分组及造模：正常组(Normal)、非酒精性脂肪肝模型组(Model)、SAC低、中、高剂量组及阿伐他汀钙组(Atorvastatin calcium, ATC)。其中正常组喂养普通饲料，其余各组喂养高脂饲料。SAC低、中、高组分别每天灌胃(Intragastrical, ig)同体积不同浓度的SAC，其剂量分别为25mg/kg，50mg/kg，，100mg/kg。高脂饲料持续喂养12周，每天称取各组大鼠观察其体重变化以及大鼠活动情况。于第4，6，8周模型组剪尾取血检测血清中甘油三酯(Total triglyceride,TG)、胆固醇(Total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白(High density lipoproteincholesterol, HDL-C)和低密度脂蛋白(Low density lipoprotein cholesterol, LDL-C)，并按血脂水平、体重以及肝组织切片病理学标准筛选符合条件的脂肪肝大鼠。 2.SAC体外抗氧化作用：采用DPPH、ABTS、还原力、β-胡萝卜素漂白法(β-beaching)、硫氰酸铁法(Ferric thioeyanate, FTC)和硫代巴比妥酸法(Thiobarbituric acid, TBA)方法检测SAC的体外抗氧化作用。 3.SAC对非酒精性脂肪肝大鼠的血脂水平影响以及体内抗氧化作用：连续ig12周后，各组大鼠心脏取血并分离血清，同时将每组大鼠肝组织匀浆，检测血清和肝脏中TG、TC、HDL-C、LDL-C、游离脂肪酸(Nonesterified Free fatty acid,NEFA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)活性、丙二醛(Malondialdehyde, MDA)水平、谷胱甘肽(Glutathione, GSH)含量和谷胱甘肽过氧化酶(Glutathione peroxidase, GSH-PX)的活性。 4.SAC对非酒精性脂肪肝大鼠的肝损伤的影响：检测血清和肝组织内谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase, ALT)和谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)水平以及肝脏组织切片HE (Hematoxylin and eosin stain)染色。同时用Western blot法检测肝组织中凋亡相关因子Bcl-2和Cleaved Caspase-3表达。 结果: 1.给药连续12周后，与正常组相比，喂养高脂饲料的模型组体重明显重于正常组，有显著性差异（p0.05）；与模型组相比，SAC低、中、高剂量组和ATC组均有不同程度的体重减轻，且SAC高剂量组和ATC组均有显著性差异（p0.05）。在肝重方面，模型组肝重明显重于正常组及SAC高剂量组和ATC组。与正常组相比，模型组肝指数有显著差异（p0.01）；与模型组相比，SAC高剂量组和ATC组肝指数均有显著性差异（p0.01）；HE染色结果显示：正常组肝细胞在12周末未出现任何脂肪侵润，而模型组肝细胞出现大量的脂肪空泡，SAC低、中、高剂量组脂肪空泡相对减少，且脂质沉积的程度有一定的缓解。与模型组相比，血清和肝组织中ALT、AST水平均下降且有显著性差异（p0.05）；与正常组相比，TG、TC、LDL-C显著升高，HDL-C明显降低且有明显差异（p0.05）。与模型组相比，TG、TC、LDL-C随着SAC浓度升高而降低，而HDL-C则降低，均有显著性差异（p0.05）。 2.抗氧化实验结果显示：SAC有一定的抗氧化作用；而β-beaching、FTC和TBA法的结果显示SAC在脂质抗氧化作用方面的能力较强；体内抗氧化实验结果显示：模型组中血清和肝脏的SOD和GSH-PX的活性均低于正常组，MDA的水平和GSH的含量均高于正常组（p0.05）。SAC低、中、高剂量组中随着药物浓度的递增，SOD和GSH-PX的活性也随着增加，而MDA的水平和GSH的含量处于一个逐渐递减的趋势且呈剂量依赖性；Western blot法检测结果显示：SAC低、中、高剂量组中Bcl-2表达明显升高，而Cleaved caspase-3的表达则明显降低。 结论: SAC具有较强的体内、外抗氧化能力，特别是抗脂质过氧化能力较强。同时SAC可明显降低NAFLD大鼠体内TG、TC、ALT、AST、HDL-C和NEFA水平，增加LDL-C水平；提高SOD和GSH-PX的活性,降低MDA的水平和GSH的含量；另外SAC可上调Bcl-2的表达以及下调Cleaved Caspase-3的表达。以上实验结果表明SAC具有明显降低非酒精性脂肪肝大鼠体内血脂水平,并通过抑制脂质过氧化的反应及线粒体的凋亡来保护肝细胞。
【关键词】：非酒精性脂肪肝 凋亡 S-烯丙基半胱氨酸 氧化应激 肝损伤
【学位授予单位】：武汉科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575.5
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 英文缩写对照表9-13
• 前言13-15
• 第一部分 SAC 对 NAFLD 大鼠血脂的影响及肝保护作用15-26
• 1.1 材料与仪器15-16
• 1.1.1 血脂水平检测相关试剂15
• 1.1.2 仪器15-16
• 1.1.3 药品16
• 1.2 方法16-19
• 1.2.1 实验动物模型分组及模型制备16
• 1.2.2 动物体重及肝指数检测16
• 1.2.3 血清及肝脏中血脂水平的检测16
• 1.2.4 甘油三酯(TG)的检测16-17
• 1.2.5 胆固醇(TC)的检测17
• 1.2.6 高密度脂蛋白(HDL-C)的检测17
• 1.2.7 低密度脂蛋白(LDL-C)的检测17
• 1.2.8 游离脂肪酸(NEFA)的测定17-18
• 1.2.9 组织蛋白浓度的测定18
• 1.2.10 谷丙转氨酶(ALT)的检测18
• 1.2.11 谷草转氨酶(AST)的检测18
• 1.2.12 石蜡包埋切片18-19
• 1.2.13 HE 染色19
• 1.2.14 统计学分析19
• 1.3 结果19-24
• 1.3.1 大鼠体重以及肝指数19-21
• 1.3.2 大鼠血清和肝脏 TG、TC、HDL-C、LDL-C 和 FFA 水平21-22
• 1.3.3 AST 和 ALT 水平22-23
• 1.3.4 HE 染色23-24
• 1.4 讨论24-26
• 第二部分 SAC 抗大鼠非酒精性脂肪肝机制的研究26-42
• 2.1 材料与仪器26-29
• 2.1.1 材料26-28
• 2.1.2 仪器28
• 2.1.3 主要试剂配置28-29
• 2.2 方法29-35
• 2.2.1 总还原力的检测29-30
• 2.2.2 β-胡萝卜素漂白实验30
• 2.2.3 硫氰酸铁法30
• 2.2.4 硫代巴比妥酸法30-31
• 2.2.5 DPPH 自由基清除实验31
• 2.2.6 ABTS 自由基清除实验31
• 2.2.7 超氧化物歧化酶活力的测定31-32
• 2.2.8 丙二醛含量的测定32
• 2.2.9 谷胱甘肽含量的测定32-33
• 2.2.10 谷胱甘肽过氧化物酶的测定33-34
• 2.2.11 Western blot 法检测肝组织 Bcl-2 和 Cleaved Caspase-3 表达34
• 2.2.12 统计学分析34-35
• 2.3 结果35-39
• 2.3.1 总还原力的检测35
• 2.3.2 β-胡萝卜素漂白35
• 2.3.3 FTC 法和 TBA 法35
• 2.3.4 DPPH 和 ABTS 清除自由基活性35-36
• 2.3.5 大鼠血清和肝脏 SOD 及 GSH-PX 活性、MDA 和 GSH 水平36-38
• 2.3.6 Western blot 法检测肝组织中 Bcl-2 和 Cleaved Caspase-3 表达38-39
• 2.4. 讨论39-42
• 结论42-43
• 参考文献43-47
• 致谢47-48
• 综述48-57
• 参考文献53-57
• 附录 1 攻读硕士学位期间发表的论文57-58
• 附录 2 攻读硕士学位期间参加的科研项目58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 朱科伦;朱郇悯;曾文铤;梁建新;;非酒精性脂肪肝流行病学的研究进展[J];广州医药;2011年04期

2 夏菁;孙涛;;非酒精性脂肪肝发病机制及治疗研究进展[J];海军总医院学报;2010年02期

3 戴宁;非酒精性脂肪肝[J];辽宁医学杂志;2004年02期

4 赵保路;;自由基、营养、天然抗氧化剂与衰老[J];生物物理学报;2010年01期

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本文编号：452213