重症急性胰腺炎相关性MiR-551b-5p对ICC细胞C-KIT基因的表达和细胞内钙离子浓度的影响

发布时间：2017-07-06 12:13

  本文关键词：重症急性胰腺炎相关性MiR-551b-5p对ICC细胞C-KIT基因的表达和细胞内钙离子浓度的影响

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【摘要】：目的:通过研究重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis SAP)相关性miR-551b-5p对ICC细胞C-KIT基因、钙离子浓度的影响,来探讨SAP相关性miR-551b-5p影响胃肠道动力功能的机制。方法:1、Cajal间质细胞(Interstitial cells of Cajal,ICC)的分离培养,从SD乳大鼠中获取其小肠组织,显微镜下剥除小肠系膜、血管及小肠浆膜层,进一步剥除小肠黏膜及黏膜下层,在剩下的平滑肌层中获取ICC细胞并进行细胞培养。2、根据研究目的将分离培养的ICC细胞分为5组:A组:正常对照组;B组:MiR-551b-5p过表达组(转染MiR-551b-5p mimic);C组:MiR-551b-5p mimic阴性对照组;D组:MiR-551b-5p下调表达组(转染MiR-551b-5p inhibitor);E组:MiR-551b-5p inhibitor阴性对照组。3、上调和下调ICC细胞中特异性MiR-551b-5p表达前后的检测。a、RT-PCR测定ICC细胞中MiR-551b-5p以及c-KIT mRNA的表达,并根据以上分组每组重复3次。b、Western blotting检测ICC细胞中c-KIT蛋白,每组重复3次。c、激光共聚焦显微镜检测ICC细胞的形态学改变和细胞内钙离子浓度变化。以免疫荧光法检测c-KIT表达,Fluo-3AM法检测钙离子浓度。结果:1、和正常对照组相比,miR-551b-5p mimic组miR-551b-5p表达显著升高(P0.01);miR-551b-5p inhibitor组miR-551b-5p表达显著降低(P0.01);miR-551b-5p mimic组和miR-551b-5p mimic阴性对照组相比,miR-551b-5p表达显著升高(P0.01);miR-551b-5p inhibitor组和miR-551b-5p inhibitor阴性对照组相比,miR-551b-5p表达显著降低(P0.01)。2、和正常对照组相比,miR-551b-5p mimic组和miR-551b-5p inhibitor组c-KIT表达无明显差异(P0.05)3、和正常对照组相比,miR-551b-5p mimic组细胞内钙离子浓度显著升高(P0.05);miR-551b-5p inhibitor组细胞内钙离子浓度显著降低(P0.05)。结论:1、SAP相关性miR-551b-5p的表达与ICC细胞内钙离子浓度的变化正相关,通过使ICC细胞内钙离子浓度的升高,使ICC细胞的起搏功能出现障碍,从而引起胃肠动力的障碍;2、SAP相关性miR-551b-5p的表达对ICC细胞中c-KIT表达无明显影响。
【关键词】：重症急性胰腺炎 Cajal间质细胞 mi R-551b-5p c-KIT基因 钙离子
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R576
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 缩略词对照表9-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料和方法12-23
• 2.1 试剂和材料12-14
• 2.1.1 主要试剂12-13
• 2.1.2 主要仪器13-14
• 2.1.3 主要试剂配制14
• 2.2 方法14-22
• 2.2.1 ICC细胞的分离培养14
• 2.2.2 小鼠小肠ICC细胞的鉴定14-15
• 2.2.3 实验分组15
• 2.2.4 细胞总RNA提取15-16
• 2.2.5 上调和下调ICC细胞中特异性MiR-551b-5p表达前后检测：16-22
• 2.3 统计学数据分析22-23
• 第3章 结果23-29
• 3.1 正常体外培养的ICC细胞及转染MiR-551b-5pmimic和MiR-551b-5pinhibitor后的ICC细胞23
• 3.2 Realtime PCR测定ICC细胞中miR-551b-5p和c-KIT mRNA表达23-25
• 3.2.1 各实验分组的ICC细胞中miR-551b-5p的表达差异23-25
• 3.2.2 各组细胞中c-KIT mRNA和c-KIT蛋白的表达25
• 3.3 激光共聚焦显微镜检测ICC细胞的形态学改变25-29
• 第4章 讨论29-34
• 4.1 ICC细胞与胃肠道电活动30-32
• 4.2 ICC细胞c-KIT基因的表达32-34
• 第5章 结论与展望34-35
• 5.1 结论34
• 5.2 展望34-35
• 致谢35-36
• 参考文献36-40
• 综述40-45
• 参考文献43-45

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1 杨晓娟;重症急性胰腺炎相关性MiR-551b-5p对ICC细胞C-KIT基因的表达和细胞内钙离子浓度的影响[D];南昌大学;2016年

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本文编号：526167