利拉鲁肽对高糖环境下大鼠肝星状细胞增殖的影响及与ERK信号通路关系研究

发布时间：2017-07-06 22:04

  本文关键词：利拉鲁肽对高糖环境下大鼠肝星状细胞增殖的影响及与ERK信号通路关系研究

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【摘要】：目的:肝纤维化是糖尿病患者众多合并症之一。而肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是肝损伤发生时生成细胞外基质的主要细胞来源,其在肝纤维化形成的过程中处于核心地位。鉴于HSC在肝纤维化的发病机制中发挥主导作用,抗纤维化的研究通常将HSC作为靶标。利拉鲁肽则是一种新型的降糖药物,类属于人胰高糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)受体激动剂,相关研究证明肝星状细胞上有GLP-1受体的表达。因此我们设计此实验,探讨利拉鲁肽对高糖环境下大鼠肝星状细胞增殖的影响及与ERK信号通路的关系。方法:1大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的培养:将复苏的细胞接种至无菌培养瓶中,应用含10%胎牛血清的低糖改良Eagle培养基(dulbecco's modification of Eagle's medium Dulbecco,DMEM)溶液(含葡萄糖5.5mmol/L)作为培养液。将细胞置于体积分数为5%的CO2饱和湿度,37℃的恒温培养箱中培养。2 MTT法确定最适利拉鲁肽浓度:HSC分为11组,分别配成以下溶液:含高糖(25.0mmol/L)以及不同浓度的利拉鲁肽(0 nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L、300nmol/L、400nmol/L、500nmol/L、600nmol/L、700nmol/L、800nmol/L、900nmol/L),观察48h,MTT法检测上述11组细胞的增殖情况。选取细胞增殖抑制率开始升到平台期的利拉鲁肽浓度700nmol/L作为最适宜利拉鲁肽浓度。MTT法确定最适ERK抑制剂PD98059浓度:HSC分为7组,分别配成以下溶液:含高糖(25.0mmol/L)以及不同浓度的PD98059(0 umol/L、25umol/L、50umol/L、100umol/L、200umol/L、300umol/L、400umol/L),观察48h,MTT法检测上述7组细胞的增殖情况。选取细胞增殖抑制率开始升到平台期的PD98059浓度200 umol/L为最适宜抑制剂浓度。3分组干预:将大鼠肝星状细胞随机分成以下5组。即正常糖对照组(5.5mmol/L)、高糖对照组(25.0mmol/L)、高渗组(5.5mmol/L葡萄糖+19.5mmol/L甘露醇)、高糖+利拉鲁肽组(25.0mmol/L高糖+最适利拉鲁肽浓度),简称利拉鲁肽组、高糖+抑制剂组(25.0mmol/L高糖+最适宜PD98059浓度),简称抑制剂组。将5组细胞在10%胎牛血清的DMEM培养基中继续培养48小时进行以下操作。4采用ELISA法定量测定大鼠肝星状细胞培养上清I型胶原含量。5 RT-PCR法检测大鼠肝星状细胞ERK mRNA的表达水平。6 Western blot法检测ERK/p-ERK蛋白表达。7数据分析:应用Excell建立数据簿,应用SPSS 17.0软件进行统计分析。所得数据采用均数±标准差(x±s)表示,应用单因素方差分析LSD法进行组间对比,P0.05为有显著意义。结果:1 MTT法测定最适宜利拉鲁肽浓度为700nmol/L,最适宜ERK抑制剂PD98059浓度为200 umol/L;2 I型胶原含量比较:与对照组相比,高渗组I型胶原含量无明显变化(P0.05),高糖组I型胶原含量明显增多(P0.05),利拉鲁肽组与抑制剂组较高糖组I型胶原含量明显减少(P0.05),抑制剂组较利拉鲁肽组I型胶原含量减少(P0.05);3 ERK mRNA的表达水平比较:与对照组相比,高渗组ERK mRNA表达无明显变化(P0.05),高糖组ERK mRNA明显表达增多(P0.05),抑制剂组与利拉鲁肽组较高糖组ERK mRNA表达明显较少(P0.05),抑制剂组少于利拉鲁肽组(P0.05);4 ERK表达结果:与对照组相比,高渗组p-ERK表达无明显变化(P0.05),高糖组p-ERK明显表达增多(P0.05),利拉鲁肽组与抑制剂组较高糖组p-ERK表达均明显较少(P0.05),抑制剂组较利拉鲁肽组p-ERK表达减少(P0.05)。结论:1高糖环境能够诱导大鼠HSC增殖。2高糖诱导HSC增殖与ERK信号通路相关。3利拉鲁肽能够通过抑制肝星状细胞ERK信号通路,来抑制高糖状态下大鼠HSC的增殖。
【关键词】：肝星状细胞 肝纤维化 利拉鲁肽 高糖 ERK通路
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.2;R587.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文缩写9-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-21
• 结果21-23
• 附图23-28
• 附表28-30
• 讨论30-34
• 结论34-35
• 参考文献35-38
• 综述 利拉鲁肽对2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病的作用38-45
• 参考文献42-45
• 致谢45-46
• 个人简历46

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本文编号：527921