降钙素基因相关肽（CGRP）与急性胰腺炎的发生发展的关系研究

发布时间：2017-07-16 22:09

  本文关键词：降钙素基因相关肽（CGRP）与急性胰腺炎的发生发展的关系研究

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【摘要】：急性胰腺炎(Acute pancreatitis)是威胁人类健康的重要疾病之一,目前认为除了酶异常分泌或异位激活机制外,还存在复杂的免疫或者神经分泌介导的炎症反应,而且可能是决定患者预后、减少致死率的关键。因此,近年来神经内分泌免疫调控体系在急性胰腺炎发生发展过程中的作用备受瞩目,其中降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)是重要的免疫调节肽,是新近发现的具有负向调节功能的神经肽,可防止免疫功能过度激活后致炎因子对机体造成的损伤作用,参与维持机体内环境的稳态平衡。CGRP不但参与急性胰腺炎的疼痛、炎症等病理过程,而且对神经元还有保护作用。⑴临床角度大样本验证血清CGRP和血清胰蛋白酶的表达量是否与病情相关。应用ELISA法检测胆源性急性胰腺炎(n=72)、高血脂性急性胰腺炎(n=60)、特发性急性胰腺炎(n=8)和正常对照(n=60)的血清胰蛋白酶、CGRP等指标,分析其相关性以及与疾病的关联,同时收集患者的一般临床资料进行统计。⑵动物水平本实验采用腹腔一次性注射雨蛙肽的方法制造急性胰腺炎C57BL/6小鼠模型,并应用组织病理、免疫组织化学等技术对降钙素基因相关肽在急性胰腺炎小鼠胰腺等组织中的表达变化进行分析。皮下注射CGRP,研究急性胰腺炎模型小鼠的胰腺炎症状是否减轻;注射商品化的CGRP受体拮抗剂(CGRP8 37),观察急性胰腺炎炎症是否加重,从正反两方面验证CGRP在急性胰腺炎中的保护作用。方法:本实验具体设计分2个步骤:一、患者血清CGRP水平与急性胰腺炎的关系以及不同类型急性胰腺炎的一般临床资料分析(1)急性胰腺炎患者和同期正常对照血清样本胰蛋白酶和CGRP的测定;(2)分析血清胰蛋白酶和CGRP作为急性胰腺炎筛查标志物的可靠性;(3)探讨不同急性胰腺炎类型(胆源性急性胰腺炎、高血脂性急性胰腺炎、特发性急性胰腺炎)之间一般临床指标的差异性;(4)分析血清CGRP和胰蛋白酶浓度的相关性。二、应用C57BL/6小鼠模型验证CGRP在急性胰腺炎发生发展过程中的作用(1)采用腹腔一次性注射雨蛙肽的方法制造急性胰腺炎小鼠模型。本实验中的动物为正常对照组、急性胰腺炎组、CGRP治疗组和CGRP受体拮抗剂(CGRP8 37)治疗组;(2)检测正常对照组和急性胰腺炎组小鼠12小时的胰腺组织胰蛋白酶活力、血清淀粉酶活力的表达变化;(3)检测正常对照组和急性胰腺炎组小鼠24小时的胰腺组织胰蛋白酶活力、血清淀粉酶活力的表达变化;(4)设立正常对照组、急性胰腺炎组、CGRP治疗组和CGRP受体拮抗剂(CGRP8 37)治疗组,检测急性胰腺炎发生24小时之后的血清CGRP、淀粉酶等的表达变化以及胰腺组织的大体病理变化。(5)各急性胰腺炎小鼠模型(包括对照组、模型组、CGRP治疗和CGRP8 37治疗组)的胰腺组织的CGRP表达情况及其与炎症浸润细胞的关系。结果:1.通过单因素分析显示三组(胆源性、高脂性、特发性)急性胰腺炎患者除了血脂和糖尿病指标(Hb A1C、GLU和TG)存在差异以外,其他如年龄、性别等一般临床指标之间均无显著差异(P≥0.05);2.男性急性胰腺炎患者的血清胰蛋白酶(n=94,75.25±33.62 pg/m L)显著高于女性患者(n=46,55.23±22.32 pg/m L),p=0.023;有炎性渗出患者的血清胰蛋白酶(85.26±42.33 pg/m L)显著高于无炎性渗出患者(42.36±18.25 pg/m L),p0.01;另外,血清胰蛋白酶的浓度还和病程病情相关,越严重越高;3.血清CGRP在各组间(胆源性、高脂性、特发性急性胰腺炎)的表达均呈显著性差异(p0.01),男性患者的血清CGRP(n=94,98.63±25.45 pg/m L)显著高于女性患者(n=46,70.12±30.56 pg/m L),p=0.029;有炎性渗出患者的血清CGRP(125.32±58.45 pg/m L)显著高于无炎性渗出患者(65.23±33.20pg/m L),p0.01;另外,血清CGRP的浓度还和急性胰腺炎的评级有关,越严重越高;4.急性胰腺炎模型组小鼠的胰腺组织蛋白酶活力显著高于正常组,其中正常对照的胰蛋白酶活力为5600±1500 U/mgprot、急性胰腺炎模型组(12小时)为7800±1800 U/mgprot和急性胰腺炎模型组(24小时)为9200±650 U/mgprot,急性胰腺炎模型组(12小时)显著高于正常组(p=0.0152),而且24小时急性胰腺炎模型组也显著高于12小时急性胰腺炎模型组(p=0.0215),均具有统计学差异,提示雨蛙素致小鼠急性胰腺炎模型建立成功;5.在胰腺病变程度评价中,CGRP干预组(制模前或制模同时)均有胰腺充血、肿胀,但程度明显较模型组轻。而应用CGRP受体阻滞剂CGRP8-37组的炎症浸润情况较模型组更为严重,实验从正反两方面证实了CGRP在胰腺损伤中的保护作用;6.模型组的血清淀粉酶(AMY)为18580±1952 U/ml显著高于正常对照组(4985±545 U/ml,p0.01);而在药物干预研究中,我们发现制模前注射CGRP和制模同时注射CGRP其血清AMY分别为5012±630 U/ml和6203±596 U/ml,不同干预时间组间不存在显著性的差异;有趣的是CGRP干预之后,其血清淀粉酶与正常对照之间没有显著性差异。而应用CGRP8-37受体阻滞剂组的血清淀粉酶(16590±780 U/ml)显著高于正常对照和CGRP干预组,而与模型组之间无显著性差异;7.CGRP受体阻滞剂干预组的血清CGRP水平(中位数13.92 pg/ml)显著低于CGRP干预组(中位数分别54.71和73.60 pg/ml)和模型组(中位数30.27pg/ml),但和正常对照组(中位数14.37 pg/ml)比较没有显著性差异;CGRP干预的时间点对血清CGRP的影响不大;CGRP干预小鼠的血清CGRP浓度显著高于模型组;这是否和外来CGRP渗入血管有关呢?8.CGRP受体阻滞剂提前干预组的急性胰腺炎小鼠胰腺组织中CGRP呈低表达或弱表达,与正常对照差异不大。而在CGRP治疗组中,可见CGRP在汇管区附近呈强表达,成簇分布。结论:1.急性胰腺炎时血清CGRP明显增高,说明CGRP在急性胰腺炎的发生发展中发挥重要的作用;2.外源性CGRP能够改善急性胰腺炎微循环从而减轻急性胰腺炎病理损害;3.CGRP受体拮抗剂(CGRP8-37)可以加重急性胰腺炎病理性损害。
【关键词】：急性胰腺炎 降钙素基因相关肽 CGRP 胰蛋白酶
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R576
【目录】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-16
• 第一部分 血清胰蛋白酶、降钙素基因相关肽与急性胰腺炎的关系16-30
• 材料与方法17-21
• 结果21-25
• 讨论25-28
• 参考文献28-30
• 第二部分 急性胰腺炎C57BL/6 小鼠模型的建立及其降钙素基因相关肽的检测30-51
• 第一节 急性胰腺炎C57BL/6 小鼠模型的建立31-39
• 材料与方法31-32
• 实验方法32-34
• 结果34-38
• 小结38-39
• 第二节 CGRP在急性胰腺炎小鼠模型胰腺组织及其血清中的表达及其CGRP和CGRP_(8-37)干预治疗的情况39-49
• 材料与方法39-40
• 实验方法40-42
• 结果42-48
• 讨论48-49
• 参考文献49-51
• 综述 急性胰腺炎的研究进展51-62
• 参考文献58-62
• 致谢62

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