肠道缺血再灌注致远隔组织损伤时TLR4与HMGB1及下游信号途径的研究

发布时间：2017-08-04 09:14

  本文关键词：肠道缺血再灌注致远隔组织损伤时TLR4与HMGB1及下游信号途径的研究

  更多相关文章： C57BL/6小鼠 肠道缺血/再灌注 HMGB1 MyD88 TRIF

【摘要】：目的：应用不同的抗体蛋白研究小鼠肠道缺血/再灌注致远隔组织损伤时,TLR4-HMGB1及其下游信号途径的作用。方法：SPF级雄性C57BL/6小鼠40只,随机分为5组：sham、control、anti-HMGB1、 anti-MyD88和anti-TRIF,每组8只。Control、anti-HMGB1、anti-MyD88和anti-TRIF组在行肠道缺血/再灌注手术前30min分别经尾静脉注射对照IgG、HMGB1、MyD88和TRIF抗体(剂量为1mg/kg,浓度为0.025%)。所有小鼠麻醉,开腹后,钝性分离暴露肠系膜上动脉(s uperior mesenteric artery, SMA)。除sham组外的四组用无创血管夹夹闭肠系膜上动脉60min后松夹再灌注60min, sham组只开腹120min,不进行缺血再灌注。术后取材,检测血浆NF-κB p65、IL-6及TNF-α浓度；肺脏和肝脏MPO的活性；肺和肠道组织形态学变化和HMGB1与NF-κB的mRNA和蛋白表达。应用单因素方差分析检验进行统计学处理。结果：在小鼠肠道缺血再灌注损伤中,与对照组比较,在缺血前通过注射抗体阻断HMGB1、MyD88和TRIF的表达能明显的降低血浆炎症因子NF-κB、IL-6 及 TNF-α的水平,同时减轻了肺脏和小肠组织的损伤。anti-HMGB1抗体、anti-MyD88抗体和anti-TRIF抗体的应用能明显的减轻缺血再灌注引起的组织损伤,提示了其治疗性的作用,其中anti-HMGB1抗体的作用最为显著。结论：HMGB1及其下游信号途径在小鼠肠道缺血再灌注损伤中具有重要作用,在二条下游信号途径中,TRIF依赖途径所起的作用比MyD88依赖途径稍大些。
【关键词】：C57BL/6小鼠 肠道缺血/再灌注 HMGB1 MyD88 TRIF
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R574
【目录】：

• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-7
• 缩略词表7-8
• 前言8-11
• 实验材料11-20
• 一. 主要实验试剂11-16
• (一) MPO检测试剂盒11
• (二) 细胞因子测定试剂盒11
• (三) H-E染色试剂盒11-12
• (四) PCR检测基因表达12
• (五) Western Blot检测蛋白表达12-16
• 二. 一般耗材16-17
• 三. 动物手术器械和实验耗材17
• (一) 手术器械17
• (二) 实验耗材17
• 四. 主要仪器设备17-20
• (一) 一般仪器17-18
• (二) H-E染色中所用的仪器18
• (三) Western blot中用的仪器18
• (四) ELISA检测相关仪器18
• (五) MPO检测相关仪器18-19
• (六) PT-PCR检测相关仪器19-20
• 研究内容和研究方法20-40
• (一) 研究设计20-21
• (二) 动物肠道缺血再灌注手术21-24
• 1. 动物21
• 2. 术前器械21-22
• 3. 尾静脉注射22
• 4. 肠道缺血再灌注术22-23
• 5. 取材23-24
• (三) 观察项目及检测方法24-39
• 1. 血浆中炎症因子的测定(ELISA法)24-26
• 2. 肺脏和肝脏组织MPO测定26-27
• 3. H-E染色27-29
• 4. HMGBl蛋白表达(Western Blot)29-32
• 5. HMGB1、NF-κB、MyD88和TRIF的基因表达(PT-qPCR)32-39
• (四) 统计学处理39-40
• 实验结果40-47
• 一、血浆中炎症因子的变化40
• 二、肝脏和肺脏组织中的MPO活性40-41
• 三、肠道和肺脏的形态学改变(光镜检查,H-E染色)41-44
• 四、肺和回肠的基因表达44-45
• 五、肺脏及空、回肠组织HMGB1和NF-κB的蛋白表达45-47
• 讨论47-59
• 一、小鼠肠道缺血再灌注操作47-48
• 二、小鼠尾静脉注射技术48-49
• 三、炎症因子与缺血再灌注损伤49-51
• 四、HMGB1与肠道缺血再灌注损伤51-55
• 五、TLR4与肠道缺血再灌注损伤55
• 六、HMGB1-TLR4与肠道缺血再灌注损伤55-57
• 七、MYD88依赖性和TRIF依赖性途径在肠道缺血再灌注损伤中的作用57
• 八、NF-κB在肠道缺血再灌注损伤中的作用57-59
• 结论59-60
• 参考文献60-71
• 综述71-84
• 综述参考文献79-84
• 硕士期间发表论文及著作84-85
• 致谢85-87

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 苏丽娜;郭剑伟;饶光玲;;小鼠尾静脉注射与断头取血实验技术的改进[J];大理学院学报;2010年06期

2 孙美芳,黄德武;水浴浸泡法在大小鼠尾静脉注射中的应用[J];实验动物科学与管理;1999年03期

3 廖晓辉;张玲;;炎症与急性缺血性肾损伤[J];生命的化学;2008年06期

，

本文编号：618754