原发性胆汁性肝硬化患者B细胞中microRNA的异常表达

发布时间：2017-08-10 05:10

  本文关键词：原发性胆汁性肝硬化患者B细胞中microRNA的异常表达

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【摘要】：背景:原发性胆汁性肝硬化(primarybiliarycirrhosis,PBC),现又称原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis,PBC),是一种以慢性进行性胆汁淤积为特征的自身免疫性肝脏疾病。PBC患者主要的诊断指标是抗线粒体抗体(anti-mitochondrial antibody,AMA)阳性,但有研究发现约5%-10%的PBC患者血清AMA为阴性。目前,肝穿刺活检进行病理诊断是临床诊断PBC病人的金标准,但肝穿刺的危险性限制其在临床上的广泛开展。近期研究发现,AMA阳性和阴性患者肝脏组织的B细胞浸润程度不同,提示B细胞在PBC发病过程中对于PBC特异性的门脉区破坏具有调节作用。微小RNA即micro RNA(mi RNA)是近年来发现的一类在转录后水平对目的基因的表达进行调控的非编码RNA。micro RNA控制多种免疫细胞亚群的分化和免疫功能,参与B细胞发生、发展的不同阶段的调控。且近期的研究发现PBC患者肝组织及外周血中均存在micro RNA的异常表达。但不同分期PBC患者B细胞中micro RNA谱是否存在异常尚无相关报道。目的:本研究拟通过对疾病各时期的PBC患者及健康对照者外周血B细胞中micro RNA谱进行检测,筛选特异性表达改变的micro RNA或micro RNA表达谱,明确micro RNA与PBC疾病进展是否有关及探讨可能的机制。方法:本研究收集2013年9月-2015年9月于吉林大学第一医院肝胆胰内科住院的PBC患者外周血32例,健康对照4例。将上述外周血提取B淋巴细胞冻存于-80℃,一并送往上海康成生物公司进行micro RNA芯片检测。异常表达micro RNA定义为错误发现率(FDR)小于0.05,倍数改变大于2。结果:32例PBC患者中病理分期I期患者7例,II期13例,III期6例,IV期6例,健康对照组4例。用micro RNA芯片筛选出各组间异常表达的micro RNA谱,与健康对照组相比,PBC患者外周血B细胞中共有558个micro RNA存在异常表达。其中表达差异倍数大于20的micro RNA有30个,其中24个表达上调,6个表达下调。与健康对照者相比,hsa-mi R-133b在各期PBC患者外周血B细胞中存在明显异常表达(差异倍数3713,FDR0.05;差异倍数2771,FDR0.05;差异倍数2960,FDR0.05;差异倍数3305,FDR0.05),但在各期PBC患者外周血B细胞中表达差异无统计学意义(P=0.39),hsa-mi R-4770和hsa-mi R-148a-3p只在I期PBC患者外周血B细胞中异常表达,且表达明显上调。在四期中均有差异表达且随病理分期加重逐渐下调的有两个micro RNAs(hsa-mi R-223-3p,hsa-mi R-21-5p)。在8例健康对照组和37例各期PBC患者进行选取部分micro RNA进行real-time PCR验证,其结果与芯片结果保持一致。研究结论:(1)hsa-mi R-4770和hsa-mi R-148a-3p只在I期PBC患者外周血B细胞中异常表达,且表达明显上调。(2)hsa-mi R-223-3p,hsa-mi R-21-5p随PBC病理分期加重逐渐下调的,可能参与了PBC的发病机制。
【关键词】：原发性胆汁性肝硬化 B细胞 micro RNA 异常表达
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.22
【目录】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 中英文缩略词对照表11-12
• 第1章 绪论12-13
• 第2章 综述13-19
• 2.1 microRNA简介13
• 2.2 microRNA与肝脏疾病的关系13-14
• 2.2.1 病毒性肝炎14
• 2.2.2 非酒精性脂肪肝14
• 2.2.3 肝纤维化14
• 2.2.4 肝细胞癌14
• 2.3 microRNA与自身免疫性肝病的关系14-18
• 2.3.1 原发性胆汁性肝硬化15-17
• 2.3.2 自身免疫性肝炎17
• 2.3.3 原发性硬化性胆管炎17-18
• 2.4 展望18-19
• 第3章 研究对象与方法19-25
• 3.1 研究对象19-20
• 3.1.1 研究对象来源19
• 3.1.2 实验组纳入及排除标准19
• 3.1.3 健康对照组纳入标准19-20
• 3.2 实验试剂与仪器20
• 3.3 实验步骤20-24
• 3.3.1 提取外周血单个核细胞（PBMC）20-21
• 3.3.2 提取CD19+B细胞21
• 3.3.3 抽取RNA21-22
• 3.3.4 mi RNA芯片测定22
• 3.3.5 q-PCR确证22-24
• 3.4 数据处理及统计分析24-25
• 第4章 结果25-37
• 4.1 研究对象一般情况25-26
• 4.2 microRNA芯片结果26-34
• 4.2.1 PBC患者与健康对照组比较26-28
• 4.2.2 各期PBC与健康对照组对比28-29
• 4.2.3 PBC各病理分期之间对比29-33
• 4.2.4 hsa-mi R-133b33
• 4.2.5 在Ⅱ期差异表达明显的mi RNA33
• 4.2.6 各期之间表达存在异常的microRNA33-34
• 4.3 microRNA芯片结果的real-time PCR验证34-35
• 4.4 与PBC疾病进展有关的异常表达microRNA的靶点预测及功能分析35-37
• 第5章 讨论37-41
• 第6章 结论41-42
• 参考文献42-48
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果48-49
• 致谢49

【参考文献】

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本文编号：648972