大麻素CB2受体激动剂AM1241对大鼠肝星状细胞系HSC-T6的影响及其机制

发布时间：2017-08-11 03:29

  本文关键词：大麻素CB2受体激动剂AM1241对大鼠肝星状细胞系HSC-T6的影响及其机制

  更多相关文章： 大麻素CB2受体 肝纤维化 氧化应激 HSC-T6 Nrf2 HO-1

【摘要】：目的:探讨大麻素CB2受体激动剂AM1241对大鼠肝星状细胞系HSC-T6的影响及其机制。方法:1、噻唑蓝法分别检测(0、20、50、80umol/L)AM1241和(0、10、20、30、40umol/L)AM630干预24h下HSC-T6的存活率,根据实验所测得的细胞存活率选择最佳的用药浓度。2、将HSC-T6分成对照组、氧化应激组、AM1241(20、80 umol/L)干预组共四组。对照组用低糖(Dulbecco’s modification of Eagle’s medium Dulbecco,DMEM)完全培养液正常培养2h,氧化应激组用含葡萄糖氧化酶(100m U/L)低糖DMEM完全培养液培养2 h,AM1241干预组分别加入20、80umol/L的AM1241干预3 h后,再加入葡萄糖氧化酶(100 mU/L)干预2 h。细胞免疫化学染色法观察各组HSC-T6胞浆中α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)的表达情况;收集各组HSC-T6的培养液上清,离心之后,ELISA检测上清液中的Ι型胶原(type colcollagenΙ,ColⅠ)的含量;检测HSC-T6裂解液中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量;Western blot检测HSC-T6中核转录相关因子(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)总蛋白与核蛋白含量。3、将HSC-T6分成对照组、氧化应激组、AM1241干预组、AM1241+AM630拮抗组共四组。对照组用低糖DMEM完全培养液正常培养12h,氧化应激组用含100mU/L的葡萄糖氧化酶的低糖DMEM完全培养液培养12h;AM1241干预组用含50umol/L AM1241的低糖DMEM完全培养液培养12h,AM1241+AM630拮抗组用大麻素CB2受体拮抗剂20umol/L AM630干预2h后,再用含50umol/L AM1241的低糖DMEM完全培养液培养12h;ELISA法检测各组HSC-T6培养液上清ColⅠ和Ⅲ型胶原(type ColcollagenⅢ,ColⅢ)的含量;检测各组HSC-T6裂解液中谷胱甘肽(glutathione,GSH)的含量;Western blot法分别检测HSC-T6中大麻素型Ⅱ受体(Cannabinoid Receptor 2,CB2)、Nrf2、血红素加氧酶1(hemeoxygenase-1,HO-1)的蛋白表达量。结果:1、(20、50、80umol/L)AM1241干预组HSC-T6的存活率依次降低,与0umol/L AM1241干预组相比较,有统计学意义(p0.05),AM630各浓度组对HSC-T6的存活率无明显作用(p0.05)。2、对照组HSC-T6胞质中无明显α-SMA表达,氧化应激组α-SMA明显表达,与氧化应激组比较,AM1241(20、80umol/L)干预组HSC-T6胞质α-SMA表达有所下降(p0.05);与对照组比较,氧化应激组HSC-T6细胞培养上清中Col I含量升高(p0.05),与氧化应激组比较,AM1241(20、80 umol/L)干预组HSC-T6细胞培养上清中Col I含量明显下降(p0.05)。氧化应激组HSC-T6较对照组HSC-T6中MDA含量上升,SOD活性明显下降(p0.05),与氧化应激组比较,AM1241(20、80 umol/L)干预组HSC-T6细胞MDA含量下降,SOD活性明显上升(p0.05);对照组、氧化应激组、AM1241(20、80umol/L)干预组HSC-T6细胞中Nrf2总蛋白表达量无明显差异(p0.05);AM1241(20、80 umol/L)干预组Nrf2核蛋白表达量比氧化应激组明显增多(p0.05)。3、与对照组相比,氧化应激组HSC-T6的细胞外基质ColⅠ、ColⅢ的表达量明显升高(p0.05),AM1241干预组HSC-T6的细胞外基质ColⅠ、ColⅢ的表达较氧化应激组明显减低(p0.05),而AM1241+AM630干预组HSC-T6 ColⅠ、ColⅢ的含量比AM1241干预组明显增高(p0.05),与氧化应激组相比无明显差异;与对照组相比,氧化应激组HSC-T6中的GSH含量有所升高(p0.05),AM1241干预组HSC-T6中的GSH含量较氧化应激组相比有所升高,而AM1241+AM630拮抗组HSC-T6中GSH的含量较AM1241干预组明显下降(p0.05),与氧化应激组无明显差异;对照组、氧化应激组、AM1241干预组、AM630+AM1241拮抗组HSC-T6中CB2的蛋白有所表达,与比对照组相比,AM1241干预组CB2的表达有所增高(p0.05);氧化应激组、AM1241干预组HSC-T6中Nrf2、HO-1的蛋白表达比对照组均明显增高,AM1241干预组增高更为明显,而AM630+AM1241拮抗组的Nrf2、HO-1的蛋白表达明显低于AM1241干预组(p0.05),与氧化应激组无明显差异。结论:大麻素CB2受体激动剂AM1241可抑制HSC-T6的增殖与活化,其机制可能与AM1241经大麻素CB2受体通道,激活HSC-T6细胞内Nrf2,使Nrf2发生核内转移,导致Nrf2和HO-1的蛋白表达量上调,增加HSC-T6的抗氧化作用有关。
【关键词】：大麻素CB2受体 肝纤维化 氧化应激 HSC-T6 Nrf2 HO-1
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-10
• 略缩词表10-11
• 引言11-12
• 材料与方法12-24
• 结果24-32
• 讨论32-35
• 结论35-36
• 参考文献36-40
• 综述40-50
• 参考文献46-50
• 作者简历50-51
• 致谢51-52
• 学位论文数据集52

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 崔澄;大麻素可以削弱恐惧性记忆[J];国外医学.药学分册;2003年03期

2 赵艳;袁祖贻;;大麻素系统抗动脉粥样硬化作用的研究进展[J];心血管病学进展;2010年03期

3 屠爱萍 ,王秉O;大麻素治疗的前景[J];国外医学.药学分册;2005年04期

4 张晶;刘建平;;大麻素类[J];中西医结合学报;2006年05期

5 陆永利;刘长金;李从德;;大麻素在神经系统中的作用[J];生理科学进展;2008年02期

6 安永超;任维;杨唐斌;;大麻素Ⅰ型受体生理调节作用研究进展[J];中国公共卫生;2011年07期

7 杨洁;赵梓纲;赵华;李恒进;;大麻素抗肿瘤机制研究进展[J];中国煤炭工业医学杂志;2009年03期

8 吴敏;任瑞宝;;大麻素类化合物抗肿瘤研究新进展[J];肿瘤;2013年05期

9 ;生活[J];健康;2012年06期

10 ;信息[J];食品科学;2007年06期

中国重要会议论文全文数据库 前4条

1 胡博;陈绍洋;王强;熊利泽;;内源性大麻素系统与神经保护[A];中国针炙学会经络分会第十届学术会议论文集[C];2009年

2 马雅萍;宋璐;刘振国;;大麻素CB1受体在成年大鼠脑分布的研究[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年

3 李熳;苏堂枫;赵一清;张令红;彭妙;武彩;施静;;电针通过激活大麻素2型受体下调炎症皮肤组织促炎细胞因子表达[A];2011中国针灸学会年会论文集（摘要）[C];2011年

4 李艳娜;倪建波;李永渝;;大麻素类物质对内毒素诱导的大鼠小肠肌电活动变化的影响[A];中国病理生理学会受体和信号转导专业委员会暨消化专业委员会联合学术会议论文汇编[C];2008年

中国重要报纸全文数据库 前6条

1 麦迪信;大麻素可抑制皮肤癌[N];医药经济报;2003年

2 张稼 编译;抑制过敏大麻树皮乳剂新用途[N];大众科技报;2007年

3 陆志城;导致骨质疏松症 大麻素样物质是元凶？[N];医药经济报;2005年

4 ;人体大麻素可能引发骨质疏松[N];中国高新技术产业导报;2005年

5 记者 刘海英;英研究称大麻素或可用于中风治疗[N];科技日报;2013年

6 何屹;骨质疏松与大麻素有关[N];科技日报;2005年

中国博士学位论文全文数据库 前6条

1 吴明春;尼古丁通过激活大麻素受体减轻Aβ1-42所致神经损伤的实验研究[D];第四军医大学;2015年

2 苏彦欣;大麻素AEA对学习记忆功能的影响及其作用机制[D];河北医科大学;2006年

3 王薇;大麻素对大鼠三叉神经节神经元上TRPV1受体的调制及其机制探讨[D];华中科技大学;2010年

4 谷新医;腺苷和大麻素在伏隔核引发去极化对抑制性突触后电流的抑制作用的研究[D];吉林大学;2004年

5 刘志强;大麻素诱导的VTA DA神经元的LTD[D];陕西师范大学;2010年

6 韩爽;三氮唑酮、香豆素和喹啉二酮类大麻素Ⅱ型受体选择性配体的设计、合成和活性评价[D];浙江大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王瑾;外周大麻素1型受体抑制剂的筛选及减肥作用机制的研究[D];江苏大学;2016年

2 史云;大麻素CB2受体激动剂AM1241对大鼠肝星状细胞系HSC-T6的影响及其机制[D];贵州医科大学;2016年

3 马泽锋;肥大细胞及大麻素CB2受体与大鼠间质性膀胱炎的相关性研究[D];昆明医科大学;2016年

4 任文婷;肽类大麻素CB1受体激动剂(m)VD-Hpα对大鼠睡眠觉醒行为的调控[D];兰州大学;2016年

5 周丽;大麻素对大鼠心肌细胞L型钙电流的抑制作用[D];华中科技大学;2006年

6 孟林伟;单次注射人工合成大麻素降低大鼠VTA多巴胺能神经元兴奋性[D];陕西师范大学;2011年

7 吴永涛;大麻素CB1、CB2受体在脑组织中分布及其表达特性的研究[D];第三军医大学;2009年

8 魏晓芳;LTD阻断肽对于HU210在小鼠识别记忆影响上的作用[D];陕西师范大学;2013年

9 朱丽;大麻素对大鼠脑出血神经元的保护作用及其作用机制的实验研究[D];重庆医科大学;2010年

10 苏堂枫;电针通过激活大麻素2型受体下调炎症皮肤组织促炎细胞因子表达[D];华中科技大学;2010年

，

本文编号：654046