丹参酮ⅡA联合异基因脐带间充质干细胞治疗大鼠肝硬化的研究

发布时间：2017-08-12 12:07

  本文关键词：丹参酮ⅡA联合异基因脐带间充质干细胞治疗大鼠肝硬化的研究

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【摘要】：目的：观察异基因人脐带间充质干细胞(Umbilcal cord mesenchymal stem cells, UCMSCs)移植后肝硬化大鼠的生物安全性；研究中药丹参酮ⅡA联合异基因UCMSCs移植治疗大鼠肝硬化的效果,以及不同移植途径对疗效的影响。方法：四氯化碳法制备肝硬化大鼠模型。造模成功后,将肝硬化大鼠随机分为5组,每组15只。分别设为：对照组,肝动脉介入组,腹腔注射组,尾静脉移植组,丹参酮ⅡA联合尾静脉移植组。严格按操作流程制备UCMSCs悬液,以细胞膜红色荧光探针DiI标记。每组UCMSCs悬液约含2×107个细胞,终体积为0.2 ml。对照组经尾静脉注入同体积医用生理盐水(0.9% NS)。丹参酮ⅡA联合尾静脉移植组,于移植当日开始,经腹腔注入20 mg/kg丹参酮ⅡA,连续7 d。记录UCMSCs移植后各组大鼠的进食、饮水、排便及活动等情况。分别于移植后1d、3d、1m及3m处死大鼠,取肝组织,制备冰冻切片,荧光显微镜下观察UCMSCs的肝内定植情况。检测大鼠静脉血中白蛋白及谷丙转氨酶的水平。RT-PCR及Western blotting分析大鼠肝组织中人源性白蛋白、细胞角蛋白18的表达量。结果：异基因UCMSCs移植后的各组大鼠进食、饮水、排便及活动与移植前相比均无明显异常,各组大鼠均无异常死亡。与模型组比较,经尾静脉注射、肝动脉介入、腹腔注射及UCMSCs联合丹参酮Ⅱ治疗后,各组大鼠肝组织内均发现UCMSCs的定植,血清谷丙转氨酶均降低,而白蛋白明显升高(P0.05)。RT-PCR及Western blotting结果显示,UCMSCs移植后,各组大鼠肝组织均表达人源性细胞角蛋白18和白蛋白,其中丹参酮ⅡA联合UCMSCs治疗组的表达量明显高于尾静脉移植组(P0.05)。三种不同移植途径,即尾静脉注射、肝动脉介入及腹腔注射,对大鼠血清谷丙转氨酶及白蛋白的表达无明显影响(P0.05),三组大鼠肝组织中人源性细胞角蛋白18和白蛋白的表达水平也无明显差异(P0.05)。结论：人脐带间充质干细胞移植后能在肝硬化大鼠的肝内定植,并具有向肝细胞样细胞分化的能力,从而改善肝硬化大鼠的肝脏功能；丹参酮ⅡA联合UCMSCs移植可在一定程度上增强移植治疗的效果。尾静脉注射、肝动脉介入及腹腔注射三种不同移植途径对肝硬化的治疗效果无明显影响。说明异基因的人脐带间充质干细胞移植治疗肝硬化是安全和有效的。该课题提示,临床上使用于细胞移植治疗肝脏疾病时,可选择易于操作且创伤小的外周静脉作为肝脏接受干细胞移植治疗的首选方法,联合使用中药丹参酮ⅡA可以提高移植治疗的效果。
【关键词】：肝硬化 人脐带间充质干细胞 丹参酮ⅡA 移植
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575.2
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-16
• 参考文献13-16
• 第一部分 理论研究16-40
• 第一章 肝硬化的中医药研究16-20
• 1. 肝硬化的中医病因病机16-17
• 2. 活血化瘀法治疗肝硬化的中医理论依据17-20
• 第二章 丹参酮ⅡA的生物学基础及药理药效学研究20-30
• 1. 丹参的品种源流20
• 2. 丹参的药理作用20-23
• 3. 丹参治疗肝病的作用机制及相关研究23-27
• 4. 中药丹参与干细胞移植的相关研究27
• 5. 丹参酮ⅡA的化学结构及药理作用27-28
• 6. 丹参酮ⅡA与干细胞相关的基础研究28-30
• 第三章 异基因脐带间充质干细胞及治疗肝硬化的相关研究30-33
• 1. 肝干细胞概述30
• 2. 脐带间充质干细胞的来源、生物学及免疫学特征30-31
• 3. 脐带间充质干细胞在肝脏疾病治疗中的实验研究31-33
• 参考文献33-40
• 第二部分 实验研究40-77
• 第四章 丹参酮ⅡA联合异基因脐带间充质干细胞移植治疗大鼠肝硬化的研究40-62
• 导言40
• 1. 材料40-42
• 2. 方法42-50
• 3. 结果50-58
• 4. 讨论58-60
• 参考文献60-62
• 第五章 异基因脐带间充质干细胞的移植途径对疗效的影响62-76
• 导言62
• 1. 材料和方法62-66
• 2. 结果66-71
• 3. 讨论71-74
• 参考文献74-76
• 第六章 总结76-77
• 附录77-79
• 在校期间发表的论文及在研课题79-94
• 致谢94-95
• 作者简介95

【参考文献】

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本文编号：661492