干扰热休克转录因子2对THP-1细胞NLRP3炎症复合体的影响

发布时间：2017-08-15 12:21

  本文关键词：干扰热休克转录因子2对THP-1细胞NLRP3炎症复合体的影响

  更多相关文章： HSF2 慢病毒RNA干扰 THP-1细胞 NLRP3炎症复合体 炎症因子

【摘要】：目的：通过慢病毒(LV-HSF2-RNAi)干扰人巨噬细胞系(THP-1)内HSF2的表达,分析探讨HSF2对THP-1细胞NLRP3炎症复合体及其下游IL-1β的影响。方法：1.选用THP-1作为研究对象,使用慢病毒(LV-HSF2-RNAi)转染THP-1,干扰其HSF2表达,使用PMA诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞；将细胞分为对照组与转染组,使用LPS刺激细胞；2.凝胶电泳PCR检测细胞NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β mRNA表达；3.Western Blot检测细胞NLRP3、ASC、Caspase-1、pro IL-1β蛋白表达；4.Elisa检测细胞培养基内IL-1β水平。结果：1、慢病毒(LV-HSF2-RNAi)转染THP-1效果理想,转染效率80%, Western blot检测HSF2干扰效果佳,HSF2干扰组中HSF2蛋白表达明显低于未转染组和阴性对照组(P0.05)；2、PMA诱导THP-1细胞分化,LPS刺激后,在对照组、干扰组、干扰对照组凝胶电泳PCR检测细胞NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、mRNA表达中,干扰组mRNA表达水平明显高于对照组及干扰对照组(P0.05)。3、PMA诱导THP-1细胞分化,LPS刺激后,在对照组、干扰组、干扰对照组Western Blot检测细胞NLRP3、ASC、Caspase-1、pro-IL-1β蛋白表达中,干扰组蛋白表达水平明显高于对照组及干扰对照组(P0.05)。4、PMA诱导THP-1细胞分化,LPS刺激后,在对照组、干扰组、干扰对照组Elisa检测细胞培养基内IL-1β水平中,干扰组细胞因子表达水平明显高于对照组及干扰对照组(未转染组：257.010±26.148；HSF2干扰组：538.800±52.250；阴性对照组：238.231±29.245 pg/ml), HSF2干扰组细胞培养基内IL-1β水平较阴性对照组及未转染组明显升高(P0.05)。结论：1.干扰HSF2后,在经PMA诱导分化,LPS刺激的THP-1细胞中,NLRP3炎症复合体各组分(NLRP3、ASC、Caspase-1)及其下游pro-IL-1β mRNA及蛋白表达水平明显较未干扰HSF2的细胞增高。2.干扰HSF2后,NLRP3炎症复合体下游IL-1β细胞培养基内水平明显较未阴性对照组及未转染组细胞增高,说明低水平HSF2可以提高巨噬细胞NLRP3炎症复合体的活化程度,并增加其下游IL-1β的释放。
【关键词】：HSF2 慢病毒RNA干扰 THP-1细胞 NLRP3炎症复合体 炎症因子
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R574
【目录】：

• 英文缩略词表5-6
• 中文摘要6-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-12
• 材料与方法12-26
• 实验结果26-39
• 讨论39-42
• 结论42-43
• 参考文献43-46
• 研究经费46
• 发表论文情况说明46-47
• 综述47-66
• 参考文献59-66
• 致谢66

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本文编号：678128