壳寡糖降低体内外非酒精性脂肪肝模型甘油三脂的作用及机制研究

发布时间：2017-08-18 04:08

  本文关键词：壳寡糖降低体内外非酒精性脂肪肝模型甘油三脂的作用及机制研究

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【摘要】：目的:研究壳寡糖(COS)对体内外非酒精性脂肪模型甘油三酯(TG)的影响及作用机制。方法:在体外将1mmol/L混合脂肪酸处理的LO2细胞作为脂肪变模型组;1mmol/L混合脂肪酸及0.5mg/mL COS共同处理的细胞为COS组,同时以未处理的细胞为对照组,24 h后进行油红O染色,测细胞内甘油三酯含量。用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及Western blot检测各实验组细胞固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FAS)和肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(CPT1A)的mRNA以及蛋白表达情况。2mmol/L的脂肪酸诱导细胞凋亡,用Hoechst染色检测COS对细胞凋亡的保护作用。在体内将雄性C57BL/6J小鼠按体重随机分为对照组、高脂组和COS组,分别给予不同的饲料喂养,16周后取小鼠肝脏分别进行HE及油红O染色,同时测定肝脏TG含量。采用SPSS17.0软件单因素方差分析进行多组数据间的比较,进一步用SNK法进行多组的两两间比较。结果:(1)相较于对照组,模型组LO2肝细胞出现脂肪变性,细胞内脂滴增多,TG含量升高。COS处理后可以降低细胞内TG的含量。(2)模型组SREBP-1c、FAS mRNA的表达明显升高(2.306±0.239对比1.010±0.174,P0.05;1.788±0.192对比1.006±0.139,P0.05),而CPT1A m RNA的水平略高(1.355±0.145对比1.010±0.176,P0.05),但差异无统计学意义。经COS处理后,SREBP-1c、FAS mRNA相对表达量(1.039±0.107、1.212±0.180,P0.05)降低,CPT1A mRNA表达水平升高(1.911±0.773,P0.05),差别有统计学意义。(3)模型组SREBP-1c及FAS蛋白表达和对照组、COS组相比最高(0.351±0.016对比0.206±0.012、0.161±0.081,P0.05;1.238±0.051对比0.287±0.031、0.332±0.023,P0.05),差异有统计学意义。COS组CPT1A蛋白的相对表达量(1.014±0.033)高于对照组和模型组(0.547±0.075、0.561±0.046,P0.05)。(4)COS可以保护脂肪酸诱导的细胞凋亡。(5)COS能减轻高脂饮食小鼠肝脏内的脂质堆积,降低TG含量。结论:COS能减轻体内外NAFLD模型肝细胞内TG蓄积,其可能机制与抑制SREBP-1c及其下游的FAS基因表达,减少TG的合成;同时,增加CPT1A基因表达,加速TG分解有关。
【关键词】：脂肪肝 非酒精性 壳寡糖 甘油三酯 小鼠模型
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575.5
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-7
• 引言7-9
• 第一部分 壳寡糖治疗非酒精性脂肪肝体外实验9-27
• 第1章 实验材料9-11
• 1.1 主要仪器和设备9
• 1.2 主要试剂和器材9-10
• 1.3 液体的配制10-11
• 第2章 实验方法11-20
• 2.1 细胞的培养11-13
• 2.2 非酒精性脂肪肝细胞模型构建13
• 2.3 COS浓度的选择13-14
• 2.4 实验分组14
• 2.5 油红O染色14
• 2.6 测定细胞内的甘油三酯含量14
• 2.7 RT-PCR检测mRNA的表达14-17
• 2.8 Western blot检测细胞目的蛋白的表达17-19
• 2.9 Hochest荧光染色19
• 2.10 统计学分析19-20
• 第3章 结果20-25
• 3.1 不同浓度的脂肪酸对细胞活性的影响20
• 3.2 脂肪酸诱导LO2细胞脂肪变性浓度的确定20-21
• 3.3 COS对LO2细胞增殖的影响21
• 3.4 COS对LO2脂肪肝细胞模型的影响21-22
• 3.5 各组细胞内SREBP-1c、FAS和CPT1A mRNA表达变化22-23
• 3.6 壳寡糖对LO2细胞SREBP-1c、FAS和CPT1A蛋白表达的影响23
• 3.7 COS抑制脂肪酸诱导肝细胞的凋亡23-25
• 第4章 讨论25-27
• 第二部分 壳寡糖治疗非酒精性脂肪肝体外实验27-33
• 第1章 实验材料27-28
• 1.1 实验动物27
• 1.2 饲料配方27
• 1.3 主要仪器和设备27
• 1.4 主要试剂和器材27-28
• 第2章 实验方法28-29
• 2.1 动物处理28
• 2.2 小鼠肝脏组织油红染色28
• 2.3 小鼠肝脏组织的HE染色28
• 2.4 肝脏组织甘油三酯(TG)测定28-29
• 2.5 统计学处理29
• 第3章 结果29-31
• 3.1 一般情况及体质量比较29-30
• 3.2 COS对小鼠肝脏病理学及肝脏脂质沉积的影响30
• 3.3 COS对小鼠肝脏TG的影响30-31
• 第4章 讨论31-32
• 第5章 结论32-33
• 参考文献33-37
• 综述37-41
• 综述参考文献39-41
• 攻读学位期间的研究成果41-42
• 中英文缩略词表42-43
• 致谢43-44

【共引文献】

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本文编号：692584