异甘草素对IFN-γ诱导的肝细胞炎症反应的作用及其机制研究

发布时间：2017-08-24 21:17

  本文关键词：异甘草素对IFN-γ诱导的肝细胞炎症反应的作用及其机制研究

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【摘要】：背景和目的肝炎是一个严重的公共卫生问题,病毒性肝炎是肝炎中的主要类型,在我国尤其是HBV感染引起的乙型肝炎。这类疾病的发生和发展与病毒、宿主遗传易感性和机体免疫力受损等多种因素相关。这些因素不仅引起急慢性肝炎,而且与肝纤维化、肝衰竭、肝癌等密切相关。趋化因子和细胞因子之间的相互作用是促进肝脏炎症进展的一个重要决定因素。γ干扰素(Interferon-y,IFN-γ)在抵御病毒感染中起着关键的作用,主要介导Th1型炎症反应,可诱导趋化因子(C-X-C基序)配体(Chemokine (C-X-C motif) ligand) (CXCL9,CXCL10,CXCL11)和细胞因子,如白介素(Ⅰnterleukin,IL)-6,肿瘤坏死因子(Tumour necrosis factor,TNF)-a等产生。这些炎性因子之间相互影响可以形成一个炎性恶性循环,是导致肝内持续炎症反应的主要机制. CXCL9, CXCL10 和 CXCL11被统称为IFN-γ诱导基因,均属于趋化因子受体3 (C-X-C motif chemokine receptor 3,CXCR3)配体,其中CXCL10在肝病中研究最为广泛,它又被称为IFN-γ诱导蛋白10(IFN-gamma inducible protein 10,IP-10).多项研究表明,IFN-γ诱导基因具有多种生物学效应,与其受体CXCR3结合有助于病毒清除的同时,也通过募集炎性效应细胞分泌各种炎症介质。IFN-γ诱导基因在多种病毒性肝炎中表达水平异常增高,进一步加重组织损伤,在慢性肝炎的发生、发展、治疗、预后等都起着重要的作用。抑制这些炎性因子可改善各种肝炎引起的不良后果。而CXCR3及其配体成为治疗肝炎新的治疗靶点。异甘草素(4,2',4'-trihydroxychalcone, Isoliquiritigenin, ISL)是一种异黄酮类化合物。它是甘草抗炎的活性成分之一,在甘草中含量极少却具有广泛的药理活性,如抗氧化、抗炎、抗血小板聚集和抗癌等。其中,ISL的抗炎作用是近年来研究的热点。本研究旨在探索ISL抗肝脏炎症的作用及其在肝细胞内可能的抗炎机制。研究方法1、检测不同病情程度的乙型肝炎患者血清中的CXCL10水平。研究人群被分为以下几组：乙肝病毒携带者、轻度慢性乙型肝炎患者、中度慢性乙型肝炎患者、重度慢性乙型肝炎患者和健康对照组,每组各21例。用ELISA法检测各组血清中CXCL10的表达水平。2、构建IFN-γ诱导肝细胞炎症反应细胞模型及分析ISL对炎性因子的影响。HepG2和L02细胞暴露于不同浓度的IFN-γ和／或ISL作用不同时间。用细胞计数试剂盒8(CCK8)法进行细胞活力评估；再分别用qRT-PCR和ELISA检测细胞内和细胞上清中趋化因子CXCL9, CXCL10, CXCL11或(和)IL-6的mRNA水平或者蛋白水平。3、分析ISL影响IFN-γ诱导的肝细胞炎性因子高表达的分子机制将HepG2和L02细胞暴露于WN-γ,不同浓度的ISL,以及IFN-γ联合不同浓度ISL中,用免疫印迹法Western Blot (WB)检测IFN-γ诱导的信号通路或ISL作用相关信号通路Janus激酶(Janus kinase, JAK)／信号转导子和转录激活子1 (Signal transducer and activator of transcription 1, STAT1),核因子-κB (Nuclear factor kappa B, NF-κB),干扰素调节因子3(Interferon regulatory factor 3, IRF3)／髓样分化因子88(Myeloid differentiation factor 88, MyD88),促分裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases, MAPK),磷酸肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B, PKB/Akt)的磷酸化和(或)总蛋白水平。结果1、CXCL10表达水平与乙型肝炎患者病情严重程度有正相关性与健康对照组相比,乙型肝炎患者血清中CXCL10水平均显著增加,差异有统计学意义(P0.05)。在慢性重度乙型肝炎患者血清中CXCL10表达水平最高,提示与乙型肝炎严重程度有相关性。2、在H epG2和L02的细胞中,用IFN-γ处理后CXCL9, CXCL10, CXCL11和IL-6的表达水平增高,这种高表达可被ISL抑制,呈剂量依赖性(IFN-γ+5μg/mlISL组vs IFN-y诱导组,P0.05)。当ISL处理剂量达到5μg/ml时,与IFN-γ诱导组相比,ISL对IL-6抑制水平小于50%,而对三种趋化因子抑制水平均大于50%。说明ISL对高表达CXCL9-11的抑制效果比ISL对IL-6的抑制效果更显著。3、ISL预处理可抑制JAK1/STAT1、IRF3/MyD88、ERK/MAPK、JNK/MAPK和PI3K/Akt信号途径的激活,且呈剂量依赖效应(IFN-γ+5μg/ml ISL组vs IFN-γ诱导组,P0.05),但对JAK2, NF-κB和p38/MAPK信号途径的激活没有作用。结论在肝细胞内ISL可下调IFN-γ诱导的炎性因子的表达水平。其分子机制是通过影响JAK1/STAT1, ERK/MAPK, JNK/MAPK, IRF3/MyD88 β Akt/PI3K信号通路的活化来发挥抗炎作用。
【关键词】：异甘草素 γ干扰素诱导基因 CXCR3配体 HepG2 L02 CXCL9 CXCL10 CXCL11 IL-6
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R512.6
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 英文缩略词简表12-15
• 1. 引言15-17
• 2. 材料与方法17-38
• 3. 结果38-51
• 4. 讨论51-55
• 5. 结论55-56
• 参考文献56-61
• 综述61-81
• 参考文献73-81
• 作者简历81-82

【参考文献】

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1 Juan R Larrubia;Selma Benito-Martínez;Miryam Calvino;Eduardo Sanz-de-Villalobos;Trinidad Parra-Cid;;Role of chemokines and their receptors in viral persistence and liver damage during chronic hepatitis C virus infection[J];World Journal of Gastroenterology;2008年47期

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本文编号：733169