UPF1在非酒精性脂肪性肝病中的作用研究

发布时间：2017-08-30 15:49

  本文关键词：UPF1在非酒精性脂肪性肝病中的作用研究

  更多相关文章： 非酒精性脂肪性肝病 NAFLD 上游移码蛋白 UPF1 PGC1α PPARα CPT1α 活性氧簇 ROS

【摘要】：背景：非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)患病率逐年增高,已成为最常见的慢性肝病之一,NAFLD的发生发展机制目前尚未完全明确。UPF1是无意义编码的mRNA降解(nonsense-mediated mRNA decay, NMD)中的关键蛋白,已有研究表明UPF1在细胞DNA复制及修复中起重要作用,NMD及DNA的损伤与肝内脂质代谢及肝细胞损伤相关,但UPF1在NAFLD发病机制中起的作用尚不明确。目的：本研究通过对L02细胞及小鼠模型的实验,探讨UPF1在NAFLD发病机制中起的作用。方法：1.通过给C57BL/6小鼠MCD饮食5周建立NAFLD模型小鼠。将肝脏L02细胞置于软脂酸、油酸(两者1：2混合)的高脂环境中培养出NAFLD肝细胞。然后用油红染色法观测细胞内脂滴,收集细胞冻液,测定其中TG含量,评估建模情况。2.从小鼠肝脏组织中及FFA诱导的L02细胞中提取RNA,进行逆转录,对合成的UPF1引物进行实时荧光定量PCR,运用Western Blot方法检查UPF1蛋白的变化,比较正常小鼠肝细胞和NAFLD小鼠、正常L02细胞和脂变的L02细胞内UPF1及蛋白的变化。3.运用siRNA干扰的方法抑制NAFLD细胞模型中UPF1的表达,检测其脂肪变性程度,并进一步检测UPF1表达抑制后脂肪酸p氧化基因(PGC1α, PPARα, CPT1α)、ROS等指标的变化,探讨UPF1在非酒精性脂肪性肝病的发病中的作用。结果：1.FFA处理L02细胞后,UPF1 mRNA及UPF1蛋白表达下降；MCD饮食处理后模型小鼠UPF1 mRNA及UPF1蛋白表达下降。2.抑制L02细胞UPF1表达后,UPF1 mRNA表达显著下降,细胞内甘油三酯含量明显增加。3.抑制L02细胞UPF1表达后,PGC1αmRNA, PPARa mRNA, CPT1αmRNA表达均下降。4.抑制L02细胞UPF1表达后,ROS升高。结论：UPF1可能在NAFLD的发生、发展中发挥一定的抑制作用,UPF1被抑制可能是NAFLD的发病机制之一。UPF1被抑制后可能通过引起PGC1α, PPARα, CPT1α的表达下降,及ROS生成增多来促进NAFLD的形成。
【关键词】：非酒精性脂肪性肝病 NAFLD 上游移码蛋白 UPF1 PGC1α PPARα CPT1α 活性氧簇 ROS
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 缩略词表10-12
• 1 引言12-15
• 2 材料与方法15-23
• 2.1 实验材料15-17
• 2.2 实验方法17-22
• 2.3 统计学方法22-23
• 3 结果23-29
• 3.1 NAFLD小鼠模型的建立23-24
• 3.2 NAFLD小鼠肝脏、FFA诱导后L02细胞UPF1 mRNA水平的变化24-25
• 3.3 NAFLD小鼠肝脏、FFA诱导后L02胞UPF1蛋白水平的变化25-26
• 3.4 抑制UPF1表达对FFA诱导的脂变L02胞的影响26-27
• 3.5 抑制UPF1表达对脂肪酸β氧化基因的影响27-28
• 3.6 抑制UPF1表达对活性氧簇ROS的影响28-29
• 4 讨论29-35
• 5 结论35-36
• 参考文献36-43
• 综述43-67
• 参考文献52-67
• 作者简历及在学期间所取得的科研成果67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 武绍梅;马岚青;;非酒精性脂肪性肝病发病机制及治疗进展[J];医学综述;2014年24期

2 李颖;洪振丰;;“二次打击”假说与非酒精性脂肪肝[J];医学综述;2013年04期

3 王春华;陈东风;;线粒体膜通透性转换孔在非酒精性脂肪肝细胞凋亡中的作用[J];重庆医学;2007年08期

4 范建高;重视非酒精性脂肪性肝病发病机制的研究[J];国外医学(消化系疾病分册);2003年06期

5 曾民德;脂肪肝发病机制及其“二次打击”假设[J];中华消化杂志;2002年03期

，

本文编号：760212