5-HT系统调控大鼠胆汁淤积诱导的抗伤害性及瘙痒机制的研究

发布时间：2017-09-02 08:13

  本文关键词：5-HT系统调控大鼠胆汁淤积诱导的抗伤害性及瘙痒机制的研究

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【摘要】：目的:我们首先建立BDL大鼠模型,并确定模型的稳定性,探究胆汁淤积大鼠中枢神经系统和皮肤中5-HT含量的变化以及胆汁淤积性大鼠外周神经系统和中枢神经系统中5-HT各受体亚型的表达变化;在BDL大鼠模型中,采用药理学和行为学等方法激活或阻断5-HT各受体亚型,来探究内源性5-HT系统调控胆汁淤积大鼠瘙痒反应及痛阈升高的分子机制。方法:将SD大鼠随机分为两组,一组进行胆管结扎(BDL组),另一组仅做相应手术处理,不做胆管结扎(SHAM组),每组5-9只。应用行为学,肝切片HE染色以及ALT试剂盒检测等技术,确定造模成功,应用高效液相色谱法(HPLC)检测大鼠外周神经系统和中枢神经系统组织中的5-HT含量变化,同时应用免疫荧光化学法观察5-HT在脊髓组织中的表达变化。在造模成功之后,在固定的时间点,对大鼠采用甩尾实验、测量机械痛、热痛等的方法研究BDL之后大鼠的痛阈变化。并于术后固定时间点,对两组大鼠采用面颊部或颈背部注射5-HT(200μg/只),通过行为学技术确定SHAM组与BDL组对5-HT诱发的瘙痒反应随着造模后时间的延伸,瘙痒程度的变化。再通过药理学等方法逐一激活或阻断5-HT各受体亚型并观察瘙痒和痛阈的变化,以及通过荧光定量Q-PCR分析确定外周及中枢神经系统中的5-HT各受体亚型的表达变化,来探究5-HT系统调控胆汁淤积大鼠瘙痒反应及痛阈升高的分子机制。结果:(1)在胆管结扎后四周内BDL大鼠并未出现明显的自发瘙痒反应,但BDL大鼠的痛阈以及5-HT所诱发的瘙痒反应比对照组显著增加。(2)免疫荧光结果显示,胆汁淤积大鼠脊髓中5-HT含量显著升高;HPLC结果显示BDL大鼠的皮肤和脊髓中5-HT的含量较对照组显著升高,而血液中的5-HT含量却显著降低。(3)荧光定量PCR分析发现,BDL组,在外周神经系统,包括背根神经节(DRG)和三叉神经节(TG),不同5-HT受体亚型发生显著上调,包括5-HT1B、5-HT1D、5-HT1F、5-HT2A、5-HT2B、5-HT3A、5-HT5、5-HT6和5-HT7。与之形成鲜明对比的是,在中枢神经系统,包括脊髓和脑干,不同5-HT受体亚型则发生显著下调,包括5-HT1A、5-HT1F、5-HT2B、5-HT2C、和5-HT3A等。(4)采用药理学等方法激活或阻断5-HT各受体亚型,来探究内源性5-HT系统调控胆汁淤积大鼠瘙痒反应及痛阈升高的分子机制,发现皮内注射5-HT2受体激动剂(a-methyl-5-HT)和5-HT7受体激动剂(LP44)在SHAM组和BDL组均可诱发瘙痒,而5-HT3A受体激动剂(2-Methyl-5-hydroxytryptamine)仅能在BDL组诱发瘙痒反应。相一致的是,腹腔注射5-HT2拮抗剂(Ketanserin)均能抑制对照组和BDL组的瘙痒反应,而腹腔注射5-HT3A拮抗剂(Ondansetron和Azasetron)仅能抑制BDL组的瘙痒反应。在脊髓水平,鞘内注射5-HT受体激动剂,包括5-HT1A(DPAT),5-HT2(a-methyl-5-HT),5-HT3A(2-Methyl-5-hydroxytryptamine)和5-HT7(LP44)能抑制对照组和BDL组大鼠瘙痒行为。鞘内注射5-HT1A受体拮抗剂(WAY-100635)增加对照组的瘙痒而抑制BDL组大鼠的瘙痒,而5-HT7受体拮抗剂(SB269970)能抑制对照组和BDL组大鼠瘙痒行为。另外,鞘内注射5-HT受体激动剂,包括5-HT1A(DPAT),5-HT2(a-methyl-5-HT),和5-HT3A(2-Methyl-5-hydroxytryptamine),以及系统注射5-HT2受体拮抗剂(Ketanserin)和5-HT3A受体拮抗剂(Ondansetron和Azasetron)能抑制BDL诱发的痛阈升高。而鞘内注射5-HT1A受体激动剂(DPAT)能降低,5-HT1A拮抗剂(WAY-100635)能升高SHAM组大鼠的痛阈。结论:(1)在胆汁淤积大鼠中存在痒觉敏化和痛阈升高的现象;(2)在胆汁淤积大鼠中,皮肤和脊髓组织中5-HT的含量升高;(3)胆汁淤积诱发背根神经节和三叉神经节不同5-HT受体亚型的表达显著上调,而在脊髓和脑干,则导致不同5-HT受体亚型的表达显著下调;(4)与引起瘙痒有关的5-HT受体主要是:5-HT2和5-HT7及5-HT3A受体,在外周激活这三个受体可以诱发瘙痒,而在中枢激活则会抑制瘙痒行为;(5)脊髓5-HT1A、5-HT2,5-HT3A,参与调控胆汁淤积诱导的痛阈升高,但是5-HT7的作用并不明显。
【关键词】：胆汁淤积 瘙痒 痛阈 5-羟色胺
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-15
• 参考文献13-15
• 材料与方法15-26
• 结果26-41
• 讨论41-45
• 参考文献45-48
• 总结48-51
• 综述51-65
• 参考文献58-65
• 攻读硕士研究生学位期间的科研及成果65-66
• 缩略词表66-67
• 致谢67-70

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