利用反转录环介导等温扩增技术检测丙型肝炎病毒

发布时间：2017-09-05 08:34

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【摘要】：鉴于丙型肝炎病毒(HCV)危害着人类健康,本研究拟用反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)建立一种简易检测方法。收集并用FQ-PCR(金标准)检测临床样本。根据HCV保守5'非编码区设计4条通用引物,然后用Taq DNA聚合酶优化传统RT-LAMP体系,通过酶切和交叉实验以评价RT-LAMP的特异性,通过和反转录PCR(RT-PCR)同时检测倍比稀释的模板以评价RT-LAMP的灵敏度。同时判断钙黄绿素和羟基萘芬蓝(HNB)染色法是否与电泳法的结果相同。结果显示,Taq DNA聚合酶可提高扩增效率,RT-LAMP的特异性好,酶切片段与预期相一致(216bp)且只有HCV被扩增,灵敏度为10IU/tube,比RT-PCR高10倍。另外,两种染料和电泳法的检测结果相同。RT-LAMP和RT-PCR检测75例临床样本的一致性差(P0.05,Kappa=0.375),和FQ-PCR的一致性好(P0.05,Kappa=0.762)。综上所述,RT-LAMP简易、特异、灵敏,适用于基层医疗机构。
【作者单位】： 中国人民解放军白求恩国际和平医院全军肝病诊治中心;承德医学院病原生物学实验中心;
【关键词】： 丙型肝炎病毒 反转录环介导等温扩增 快速检测
【基金】：全军医药卫生科研基金资助项目(CBJ14C010)
【分类号】：R512.63;R440
【正文快照】： 引言丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染呈世界分布,全球丙肝感染人数达1.3~1.7亿,我国HCV感染人数经推算有1 000万,并有部分患者可发展为肝硬化甚至肝癌[1]。目前丙型肝炎(简称丙肝)的疗效不佳,并且患者使用干扰素或利巴韦林的副作用较明显,如失眠、抑郁、脱发、贫血等

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