富纳米硒沼泽红假单胞菌对四氯化碳导致肝损伤小鼠的保护作用研究

发布时间：2017-09-07 06:46

  本文关键词：富纳米硒沼泽红假单胞菌对四氯化碳导致肝损伤小鼠的保护作用研究

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【摘要】：本文采用单因子实验和四因素三水平正交实验,确定了沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)还原亚硒酸钠为红色单质硒的最优条件。在优化实验中,先确定了沼泽红假单胞菌还原亚硒酸钠四个因素(亚硒酸钠浓度、菌种接种量、培养基初始pH值、培养时间)的最佳水平,再选取四因素三水平：亚硒酸钠浓度(lmmol/L、2mmol/L、3mmol/L)、菌种接种量(5%、10%、15%)、培养基初始pH值(5、6、7)、培养时间(6d、7d、8d)进行正交实验,确定了转化的最佳水平。在此基础上,为进一步研究本实验室转化得到的红色单质硒的生物活性,将雄性昆明小鼠随机分为9个组,即空白对照组、富纳米硒沼泽红假单胞菌高剂量对照组(200μg/kg.BW)、三个浓度的富纳米硒沼泽红假单胞菌处理组(50、100、200μg/kg.BW+CCl4)以及三个相应剂量沼泽红假单胞菌处理组,研究富纳米硒沼泽红假单胞菌对小鼠CCl4致急性肝损伤的肝保护效应。小鼠按相应剂量的溶液连续灌胃14d之后,除空白对照组和富纳米硒沼泽红假单胞菌高剂量对照组腹腔注射植物油之外,其余组均一次性腹腔注射1%的CCl4(10mL/Kg.BW),建立急性肝损伤模型。造模24h后取血清,测各项血清酶指标：谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)；取肝脏和脾脏分别计算肝脏指数和脾脏指数；取肝组织检测肝脏抗氧化酶(SOD、CAT、GPx)活力以及脂质过氧化产物(MDA)水平；采用常规石蜡切片法研究了富纳米硒沼泽红假单胞菌对小鼠肝组织病理结构与功能的影响。旨在验证富纳米硒沼泽红假单胞菌对小鼠肝脏的保护作用。结果显示：1.通过沼泽红假单胞菌将亚硒酸钠还原为红色单质硒条件的优化：对转化率影响较大的因素由高到低依次为：亚硒酸钠浓度培养时间培养基初始pH值菌种接种量；N菌株还原亚硒酸盐得到红色单质硒的最适条件为：亚硒酸钠添加量2.0mmol/L、培养时间8d、培养基初始pH7.0和接种量15%,优化后转化率达到91.36%。2.小鼠体内生理生化实验结果：富纳米硒沼泽红假单胞菌最高剂量对照组与空白对照组基本保持在同一水平,四氯化碳模型组均与空白对照组差异极显著。富纳米硒沼泽红假单胞菌能够明显降低由CCl4诱导的肝损伤引起的小鼠血清中ALT、AST、 AKP、LDH升高；降低肝损伤导致的肝脏指数和脾脏指数增加；提高肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力,降低肝组织内丙二醛(MDA)含量,且硒剂量越高,保护效果越明显。3.小鼠肝脏组织形态学观察结果显示：富纳米硒沼泽红假单胞菌能够减轻四氯化碳损伤导致的肝脏表面出血点症状；能够明显改善肝损伤小鼠的肝细胞坏死、炎性浸润、气球样变、细胞水肿、核固缩现象,保护效果呈明显剂量效应,最高剂量保护组仅有散在点状坏死,轻微细胞水肿。由以上研究结果得出如下结论：①富纳米硒沼泽红假单胞菌在一定程度上可以减少肝损伤所致血清酶的释放,提高抗氧化酶活力。②能够改善四氯化碳所致肝损伤引起的肝细胞坏死、发炎等症状。③本实验使用的最大剂量富纳米硒沼泽红假单胞菌对小鼠肝脏无毒,且对四氯化碳所致肝损伤小鼠具有保肝作用,其保护机制可能为富纳米硒沼泽红假单胞菌能够清除自由基,抑制脂质过氧化,提高机体抗氧化水平,保护细胞膜、线粒体膜等生物膜的完整性,从而保障细胞正常生理功能。
【关键词】：富纳米硒沼泽红假单胞菌 肝损伤 保护 抗氧化 组织细胞结构观察
【学位授予单位】：山西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575
【目录】：

• 中文摘要10-12
• 英文摘要12-14
• 第一章 综述14-22
• 1 硒的生物学活性14-16
• 1.1 抗氧化14-15
• 1.2 增强免疫能力15
• 1.3 硒的抗肿瘤功能15-16
• 1.4 硒的其它功能16
• 2 硒的存在形式16-18
• 2.1 硒的三种存在形式16-17
• 2.2 三种硒的特点17
• 2.3 单质硒的微生物制备方法17-18
• 2.3.1 微生物转硒机制17-18
• 2.3.2 沼泽红假单胞菌制备单质硒18
• 3 硒与肝保护18-19
• 4 研究目的及意义19-22
• 第二章 光合细菌还原亚硒酸盐为单质硒条件的优化22-32
• 摘要22-23
• 1 材料与方法23-25
• 1.1 菌种及培养基23-24
• 1.1.1 菌种23
• 1.1.2 培养基23-24
• 1.2 光合细菌还原亚硒酸盐转化率的优化24-25
• 1.2.1 光合细菌培养24
• 1.2.2 亚硒酸钠添加量对光合细菌还原亚硒酸盐转化率的影响24
• 1.2.3 培养基初始pH值对光合细菌还原亚硒酸盐转化率的影响24
• 1.2.4 培养时间对光合细菌还原亚硒酸盐转化率的影响24
• 1.2.5 接种量对光合细菌还原亚硒酸盐转化率的影响24
• 1.2.6 光合细菌还原亚硒酸盐的正交试验24-25
• 1.2.7 含硒量测定25
• 1.2.8 数据统计25
• 2 结果与讨论25-29
• 2.1 亚硒酸钠添加量对光合细菌还原亚硒酸盐转化率的影响25
• 2.2 培养时间对光合细菌还原亚硒酸盐转化率的影响25-26
• 2.3 培养基初始pH值对光合细菌还原亚硒酸盐转化率的影响26
• 2.4 接种量对光合细菌还原亚硒酸盐转化率的影响26-27
• 2.5 光合细菌还原亚硒酸盐的正交试验27-29
• 3 小结29-30
• Abstract30-32
• 第三章 富纳米硒沼泽红假单胞菌对肝损伤小鼠的保护作用32-48
• 摘要32-33
• 1 材料与方法33-35
• 1.1 实验材料33
• 1.2 主要试剂33
• 1.3 实验方法33-34
• 1.3.1 富纳米硒沼泽红假单胞菌的制备33
• 1.3.2 实验动物的饲养及肝损伤模型的建立33-34
• 1.3.3 取材34
• 1.4 检测方法34-35
• 1.4.1 体视显微镜观察肝组织形态34
• 1.4.2 组织切片观察34-35
• 1.4.3 血清酶的测定35
• 1.4.4 数据分析35
• 2 实验结果35-44
• 2.1 小鼠基本情况观察35-36
• 2.2 富纳米硒沼泽红假单胞菌对肝损伤小鼠肝脏和脾脏指数的影响36-37
• 2.3 富纳米硒沼泽红假单胞菌对肝损伤小鼠血清酶的影响37-38
• 2.4 富纳米硒沼泽红假单胞菌对肝损伤小鼠肝脏形态的影响38-40
• 2.5 富纳米硒沼泽红假单胞菌对肝损伤小鼠肝组织显微结构的影响40-44
• 3 讨论44-46
• 3.1 富纳米硒沼泽红假单胞菌对肝损伤小鼠肝脏和脾脏指数的影响45
• 3.2 富纳米硒沼泽红假单胞菌对肝损伤小鼠血清酶含量的影响45-46
• 3.3 富纳米硒沼泽红假单胞菌对肝损伤小鼠组织病理学的影响46
• 4 小结46-47
• Abstract47-48
• 第四章 富纳米硒沼泽红假单胞菌对肝损伤小鼠抗氧化水平和脂质过氧化水平的影响48-55
• 摘要48
• 1 材料与方法48-49
• 1.1 实验材料48-49
• 1.2 主要试剂49
• 1.3 实验方法49
• 1.3.1 富纳米硒沼泽红假单胞菌的制备49
• 1.3.2 实验动物的饲养及肝损伤模型的建立49
• 1.3.3 取材49
• 1.3.4 检测方法49
• 1.3.5 数据分析49
• 2 结果49-51
• 2.1 富纳米硒沼泽红假单胞菌对肝损伤小鼠肝组织抗氧化酶活力的影响49-50
• 2.2 富纳米硒沼泽红假单胞菌对肝损伤小鼠肝组织脂质过氧化水平的影响50-51
• 3 讨论51-53
• 3.1 富纳米硒沼泽红假单胞菌对肝损伤小鼠抗氧化酶的影响51-53
• 3.2 富纳米硒沼泽红假单胞菌对肝损伤小鼠脂质过氧化水平的影响53
• 4 小结53-54
• Abstract54-55
• 参考文献55-64
• 在读期间发表论文64-65
• 致谢65-66
• 个人简况及联系方式66-67
• 承诺书67-68

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 宁婵娟;吴国良;;微量元素硒与人体健康及我国富硒食品的开发状况[J];山西农业科学;2009年05期

2 ;Effects of AT1 receptor antagonist,Iosartan,on rat hepatic fibrosis induced by CCl_4[J];World Journal of Gastroenterology;2000年04期

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本文编号：808033