盐霉素对大鼠肝星状细胞增殖及细胞外基质分泌影响的研究

发布时间：2017-09-11 23:40

  本文关键词：盐霉素对大鼠肝星状细胞增殖及细胞外基质分泌影响的研究

  更多相关文章： 盐霉素 大鼠肝星状细胞 细胞外基质 Wnt/β-catenin信号通路

【摘要】：目的:研究盐霉素在体外对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖及细胞外基质(ECM)分泌的影响,并探讨其作用的发挥是否通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来实现。方法:以HSC-T6为研究对象,分别用不同浓度的盐霉素及其溶媒DMSO处理HSC-T6不同时间后,用CCK-8法检测盐霉素对HSC-T6细胞增殖的影响,并得出最适浓度及时间,以调整后续实验的药物浓度。用光学倒置显微镜观察正常组、溶媒DMSO组及盐霉素处理组的细胞形态变化。应用化学发光免疫技术检测肝纤维化指标Ⅲ型前胶原(PCⅢ)及透明质酸(HA)的表达情况。用流式细胞仪(PI单染法)测细胞周期。分别采用RT-PCR和Western Blot检测Wnt/β-catenin信号通路中关键信号分子β-catenin、cyclin D1、c-Myc的mRNA及蛋白表达水平。结果:盐霉素体外抑制HSC-T6增殖,在一定范围内呈剂量、时间依赖关系,24小时的IC50为27.7μmol/L,以此调整接下来的处理组浓度分别为15μmol/L、30μmol/L及60μmol/L。光学倒置显微镜下可见处理组细胞缩小,胞核固缩,部分细胞碎裂成片,且随着盐霉素浓度增加,形态改变更加明显。化学发光免疫结果提示盐霉素能降低PCⅢ、HA蛋白的表达水平,盐霉素浓度越大,PCⅢ、HA水平越低。盐霉素能阻滞HSC-T6于G1期:随药物浓度的加大,G1期细胞比例增大,而S期细胞比例减少。盐霉素能下调β-catenin、cyclin D1、c-Myc mRNA的水平,盐霉素能下调β-catenin、cyclin D1、c-Myc蛋白水平,呈剂量依赖关系。结论:盐霉素在体外可抑制HSC-T6细胞增殖及细胞外基质分泌,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来实现。
【关键词】：盐霉素 大鼠肝星状细胞 细胞外基质 Wnt/β-catenin信号通路
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 主要英文缩略语及索引8-11
• 第1章 绪论11-13
• 第2章 材料与方法13-25
• 2.1 实验材料13-15
• 2.1.1 实验细胞13
• 2.1.2 主要试剂及配制13-14
• 2.1.3 主要仪器设备14-15
• 2.2 实验方法15-25
• 2.2.1 细胞的培养15-16
• 2.2.2 实验分组16-17
• 2.2.3 CCK-8 法检测细胞增殖-毒性作用17-18
• 2.2.4 光学倒置显微镜观察细胞形态18
• 2.2.5 化学发光法检测HA、PCⅢ的表达18
• 2.2.6 流式细胞仪检测细胞周期（PI单染法）18-19
• 2.2.7 RT-PCR测 β-catenin、cyclin D1、c-Myc mRNA的表达19-22
• 2.2.8 WB检测 β-catenin、cyclin D1、c-Myc蛋白的表达22-25
• 第3章 实验结果25-37
• 3.1 盐霉素对HSC-T6增殖的抑制作用25-26
• 3.2 盐霉素对HSC-T6细胞形态的影响26-27
• 3.3 盐霉素抑制HA、PCⅢ的分泌27-29
• 3.4 盐霉素对HSC-T6细胞周期的影响29-31
• 3.5 盐霉素下调 β-catenin、cyclin D1、c-Myc的mRNA表达31-34
• 3.6 盐霉素下调 β-catenin、cyclin D1、c-Myc的蛋白表达34-37
• 第4章 讨论37-41
• 4.1 盐霉素抑制HSC-T6细胞增殖37-38
• 4.2 盐霉素抑制HA、PCⅢ分泌38
• 4.3 盐霉素阻滞HSC-T6细胞周期于G1期38-39
• 4.4 盐霉素抑制HSC-T6增殖及HA、PCⅢ分泌的机制探讨39-40
• 4.5 总结与展望40-41
• 第5章 结论41-43
• 参考文献43-47
• 文献综述47-59
• 参考文献54-59
• 硕士期间科研成果59-61
• 致谢61

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张鹏伟;储消和;郭美锦;储炬;庄英萍;张嗣良;;响应面设计优化盐霉素发酵条件[J];中国抗生素杂志;2010年02期

2 陈代杰,周光悹,许文思;盐霉素生物合成的研究——Ⅰ.浅蓝菌素对盐霉素生物合成的影响[J];抗生素;1988年03期

3 陈代杰,周光悹,许文思;盐霉素生物合成的研究 Ⅱ.短链脂肪酸在盐霉素生物合成中作用机制的初步探讨[J];抗生素;1988年03期

4 蒋顺进;汤晓林;;盐霉素发酵工艺的优化研究[J];今日药学;2010年10期

5 高圣君;杭海峰;陈中兵;郭美锦;储炬;庄英萍;张嗣良;;流加葡萄糖策略对盐霉素生物合成调控影响[J];中国抗生素杂志;2013年08期

6 董秀云;徐文浩;谢志斌;殷娟;何鹏;张静;杨菲;;成功救治急性盐霉素中毒一例[J];临床合理用药杂志;2011年25期

7 刘朋;杭海峰;储消和;郭美锦;储炬;庄英萍;张嗣良;;盐霉素自身抗性高产突变菌株筛选[J];中国抗生素杂志;2012年02期

8 董秀云;徐文浩;谢志斌;殷娟;何鹏;张静;杨菲;;成功救治急性盐霉素中毒一例[J];中国全科医学;2010年32期

9 杨亚勇;蒋顺进;;提高白色链霉菌盐霉素产量的工艺研究[J];中国抗生素杂志;2006年11期

10 邵明举;邢介玲;王兴蕾;邵华;刘红;许荣廷;姜笃银;;误食盐霉素中毒致死亡1例[J];山东大学学报(医学版);2008年03期

中国重要会议论文全文数据库 前3条

1 马立农;陈杖榴;;高效液相色谱柱前衍生化法测定饲料中的盐霉素[A];第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2001年

2 石永芝;王海;林建强;曲音波;;盐霉素发酵补油工艺研究[A];中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集[C];2005年

3 陈智慧;;管碟法测定饲料中盐霉素的不确定度评定[A];首届中国兽药大会动物药品学暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008学术年会论文集[C];2008年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 山东鲁抗动植物生物药品事业部 张正海 孟伟民 朱志强;盐霉素的应用及前景[N];中国畜牧水产报;2000年

2 ;盐霉素的应用及前景[N];中国畜牧水产报;2001年

3 中国农业科学院饲料研究所　武书庚 张海军 李鹏 齐广海 宁夏多维药业有限公司　秦耀明;盐霉素对猪生产性能的影响[N];中国畜牧兽医报;2006年

4 ;盐霉素的应用及前景（未完待续）[N];中国畜牧水产报;2001年

5 $$四川农业大学动物营养研究所 张克英 陈代文 $$山东鲁抗动植物生物药品事业部 张正海 周庆举;盐霉素对生长猪生产性能的影响及适宜添加量的研究[N];中国畜牧水产报;2001年

6 记者 陈青 通讯员 余飞;盐霉素可抑制肝胰腺肿瘤生长[N];文汇报;2013年

7 ;盐霉素的应用及前景（未完待续）[N];中国畜牧水产报;2000年

8 ;盐霉素的应用及前景（未完待续）[N];中国畜牧水产报;2001年

9 莱州市畜牧兽医站 原丽丽;随意加大盐霉素用量不可取[N];山东科技报;2006年

10 ;盐霉素的应用及前景（未完待续）[N];中国畜牧水产报;2000年

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 马驰;联合应用甲萘醌、维生素C和盐霉素治疗胶质瘤的体外研究[D];吉林大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 张祖雯;盐霉素联合17-AAG对胃癌细胞体外增殖的影响[D];延安大学;2015年

2 甘生敏;盐霉素对鼻咽癌CNE-2干细胞放疗敏感性的影响[D];重庆医科大学;2015年

3 李睿;盐霉素抑制上皮性卵巢癌细胞发生上皮间质转化的作用及其机制研究[D];山东大学;2016年

4 李桂莲;盐霉素对大鼠肝星状细胞增殖及细胞外基质分泌影响的研究[D];南华大学;2016年

5 陈荣;盐霉素通过Wnt/β-catenin信号通路诱导大鼠肝星状细胞凋亡的机制研究[D];南华大学;2016年

6 吴涛;盐霉素对DU145干细胞的抑制作用及其分子机制[D];南华大学;2016年

7 储消和;盐霉素高产菌推理选育及发酵工艺研究[D];浙江工业大学;2008年

8 张劲松;盐霉素颗粒剂工艺的改进研究[D];天津大学;2011年

9 张鹏伟;盐霉素发酵过程优化与放大研究[D];华东理工大学;2010年

10 戚凤娥;盐霉素发酵工艺的调控分析与放大[D];山东大学;2006年

，

本文编号：833804