IBD疾病特异与疗效监测血清标志物的蛋白质组学筛选初探

发布时间：2017-09-13 08:51

  本文关键词：IBD疾病特异与疗效监测血清标志物的蛋白质组学筛选初探

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【摘要】：研究背景和目的炎性肠病(Inflammatory Bowel Disease, IBD)是一种慢性肠道炎症性疾病,包括克罗恩病(Crohn's Disease, CD)和溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis, UC),临床表现为反复发作的腹痛、腹泻、粘液血便等,严重影响患者生活质量。目前临床上尚无广泛使用且高效的疾病诊断的血清标记物。糖皮质激素(简称激素)通常能够显著抑制炎症,迅速缓解症状,但因其不良反应及其无法维持疾病缓解,故难以长期使用。同时部分患者存在激素依赖或激素抵抗,因而寻找激素疗效预测指标有着重大的临床意义。近年来,应用蛋白质组学方法寻找临床标志物已经成为蛋白质组学的核心应用之一。2014年李智立教授课题组使用Native-PAGE、SDS-PAGE和MALDI-FTICR MS方法发现并证实了新型循环免疫炎症相关蛋白复合物(Immunoinflammation-Related Protein Complexes, IIRPCs)能够作为诊断癌症的个体化生物标志物。本研究拟在以上研究的基础上,使用Native-PAGE、SDS-PAGE和MALDI-FTICR MS方法寻找IBD特异的血清蛋白标志物,帮助疾病诊断,并通过对比激素治疗前后IBD患者血清蛋白差异,寻找IBD激素治疗敏感性和疗效预测指标。第一部分IBD疾病特异血清蛋白标志物的蛋白质组学筛选方法：对65例健康对照、57例结直肠癌、69例UC和67例CD患者血清行Native-PAGE,基于IIRPCs对患者血清进行分类,使用Quantity One软件对IIRPCs进行定量。使用SDS-PAGE对IIRPCs进一步分离,并用质谱鉴定IIRPCs包含的主要蛋白种类。结果：根据血清IIRPCs的条带数目和位置,所有样本可分为a、b、c和其他类型,以a、b型较为常见。其中a型包括a1、a2、a3、a4,4个IIRPCs,b型包括b1、b2、b3、b4、b5,5个IIRPCs,c型为空白型,不含IIRPCs。UC、CD和结直肠癌患者IIRPCs水平较健康人明显升高(p0.05),且IBD患者IIRPCs水平高于结直肠癌患者(a2、a3、a4、b3、b4,p0.05),而UC与CD患者间IIRPCs水平无统计学差异(p0.05)。活动期UC患者血清URPCs水平高于缓解期患者(中度活动期b2、b4、b5,p0.05；重度活动期a3、b2、b5,p0.05)。活动期CD患者血清IIRPCs水平较缓解期升高,但无统计学差异(p0.05)。a3与ESR Pearson相关系数0.576,p值0.001;a3与hsCRP Pearson相关系数0.392,p=0.020；b4与ESR Pearson相关系数0.426,p=0.027；b4与hsCRP Pearson相关系数0.375,p=0.054。初步质谱鉴定结果表明,血清ⅡRPCs的主要组分为IgG1、IgA1、触珠蛋白、补体C3、补体C4A、补体因子H等。结论：1. 可利用简单的Native-PAGE方法,分离疾病相关的血清ⅡRPCs。并基于血清IRPCs的类型,IBD样本可分为四类：类型a、b、c和其他类型,以a、b型较为常见。2. 血清ⅡRPCs的主要组分为IgG1、IgA1、触珠蛋白、补体C3、补体C4A、补体因子H等。这些蛋白质是一些与免疫系统、炎症系统和补体系统相关的蛋白质。3. UC、CD患者ⅡRPCs水平较健康人明显升高,ⅡRPCs对于IBD的诊断具有极高的灵敏度。活动期UC、CD患者ⅡRPCs水平较缓解期升高,提示ⅡRPCs水平可作为疾病活动度评估指标且与临床常用炎症指标如血沉、超敏C反应蛋白具有一定的正相关性。4. IBD患者ⅡRPCs水平高于结直肠癌患者。ⅡRPCs对于IBD和结直肠癌有一定的鉴别诊断能力,但无法鉴别UC和CD患者。第二部分IBD激素疗效预测血清蛋白标志物的蛋白质组学筛选方法：对45组IBD患者激素治疗前后的血清标本行Native-PAGE,对比激素治疗前后血清蛋白差异,结合临床资料分析激素疗效预测指标。结果：与治疗前相比,激素治疗第1天、第7天、第14天血清IIRPCs浓度变化趋势基本一致,且每种血清类型各条带浓度变化趋势基本一致。根据IIRPCs浓度变化趋势分为上升趋势组和下降趋势组,统计学分析表明,上升趋势组和下降趋势组IIRPCs水平均存在统计学差异(p0.05)。结合临床资料分析表明,上升趋势组和下降趋势组治疗前HGB水平和治疗前IIRPCs水平(a4、b5)存在统计学差异。对21例激素有效和7例激素无效UC患者进行分析,结果表明两组间白蛋白水平和CMV感染率存在统计学差异。由于激素无效组仅2例收集到治疗后时间点血标本,暂无法分析激素疗效与IIRPCs水平变化趋势间是否存在相关性。结论：IBD患者在激素治疗后IIRPCs呈两种变化趋势：上升趋势和下降趋势。上升趋势组和下降趋势组治疗前HGB水平和治疗前IIRPCs水平(a4、b5)存在统计学差异。
【关键词】：蛋白质组学 聚丙烯酰氨凝胶电泳 免疫炎症相关蛋白复合物 诊断标志物 活动度 炎性肠病 激素抵抗 预测因素 白蛋白水平 CMV感染
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R574
【目录】：

• 缩略词表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 第一部分 IBD疾病特异血清标志物的蛋白质组学筛选13-52
• 前言13-15
• 实验材料15-18
• 实验方法18-23
• 实验结果23-48
• 讨论48-51
• 第一部分结论51-52
• 第二部分 IBD激素疗效预测血清标志物的蛋白质组学筛选初探52-62
• 前言52-53
• 实验材料与方法53-54
• 实验结果54-59
• 讨论59-61
• 第二部分结论61-62
• 参考文献62-65
• 综述65-72
• 参考文献69-72
• 致谢72-73

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本文编号：842712