天津地区HEV动物宿主及其基因型的研究

发布时间：2017-09-17 15:42

  本文关键词：天津地区HEV动物宿主及其基因型的研究

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【摘要】：目的1.选择天津市不同区县的猪、牛、羊、兔和狗作为研究对象,调查这些与人类生活密切相关的动物血清中HEV抗体的流行情况;2.对采集的动物粪便标本进行RNA检测,并对检出的动物HEV RNA进行基因型和亚型分析,从而对动物HEV与人类的HEV流行和传播的相关性进行进一步阐释。方法1.在天津市武清区和宝坻区屠宰厂收集猪血液标本202份,牛血液标本97份,羊血液标本163份,武清区、宝坻区和西青区三个农贸市场收集兔血液标本78份,北辰区和西青区宠物医院收集狗血液标本188份,每份标本1-2ml。所有标本均低温保存迅速运送到实验室,分离血清,-20℃冷冻保存备检。使用北京万泰生物药业有限公司生产的双抗原夹心酶联免疫检测试剂盒检测动物血清标本中抗-HEV Ig G抗体。2.将天津市武清区和宝坻区屠宰厂收集的202份猪血液标本,78份兔血液标本,使用戊型肝炎病毒Ig G抗体诊断试剂盒(上海B公司)进行二次检测,将检测结果与北京A公司生产的双抗原夹心酶联免疫检测试剂的检测结果进行比较。3.对天津市武清区、西青区和宝坻区收集到的60份猪粪便标本、50份兔粪便标本、50例狗粪便标本进行HEV RNA检测。用逆转录巢式PCR(RT-n PCR)检测戊型肝炎病毒核糖核酸(HEV RNA),并对PCR阳性扩增产物进行克隆测序(北京诺赛基因组研究中心有限公司),用Bioeditv7.0.9和MEGA 6.0软件按目前新的分型方法所选用的参考序列进行核苷酸序列相似性比较和生物进化树分析。结果1.天津地区屠宰场猪血清中抗-HEV阳性率为77.2%(156/202);牛血清中抗-HEV阳性率为7.2%(7/97);羊血清中抗-HEV阳性率为6.1%(10/163);兔血清中抗-HEV阳性率为16.6%(13/78);狗血清中抗-HEV阳性率为18.6%(35/188),其中流浪狗血清中抗-HEV阳性率为33.7%(29/86),宠物狗血清中抗-HEV阳性率仅为5.9%(6/102);总体阳性率为30.3%(见表1);流浪狗血清抗体水平为2.67±1.23,宠物狗血清中抗体水平为0.58±0.39,两组数据存在显著差异(P0.05)。2.上海B公司生产的戊型肝炎病毒Ig G抗体诊断试剂盒阳性率低于北京A公司生产的抗-HEV抗体检测试剂盒,两种试剂符合率为95.7%(268/280)(表4),检测结果具有一致性。3.天津地区猪粪便标本的HEV RNA阳性率为6.7%(4/60),阳性标本分别命名为sw-tj11、sw-tj17、sw-tj46、sw-tj48。其中sw-tj11与4g亚型相似性最高,sw-tj17与4a亚型相似度最高,sw-tj46、sw-tj48与4d亚型相似度最高,这两株之间相似度为99%,应该为同一病毒株感染;兔粪便标本的HEV RNA阳性率为4%(2/50),阳性标本分别命名为R-tj3、R-tj9,与基因3型的参考序列相似度为74%-90%,属于基因3型;50例狗粪便悬液HEV RNA检测结果全部为阴性。结论1.本次调查研究结果显示天津地区与人密切接触的五种动物总体抗HEV Ig G抗体阳性率为30.3%(221/728),五种动物均存在HEV的感染,且猪、狗、兔的自然感染比例较高,但人与这些动物密切接触是否会感染HEV需要进一步研究。2.调查结果显示流浪狗血清中抗HEV-Ig G抗体水平与宠物狗抗HEV-Ig G抗体水平存在显著差异,流浪狗HEV传播情况明显要比宠物狗严重。3.北京A公司的试剂盒阳性率略高于上海B公司的试剂盒,两种试剂具有良好的符合率。4.天津地区存在基因4型猪HEV流行和基因3型兔HEV流行。
【关键词】：戊型肝炎病毒 动物宿主 基因型 基因亚型 戊型肝炎病毒抗体
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65;R512.6
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语10-11
• 前言11-14
• 研究现状、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、天津5种潜在HEV动物宿主抗体检测14-19
• 1.1 对象和方法14-16
• 1.1.1 标本本源14
• 1.1.2 试剂14
• 1.1.3 仪器设备14
• 1.1.4 检测方法14-16
• 1.2 结果16
• 1.3 讨论16-19
• 二、两种抗-HEV抗体检测试剂性能比较19-24
• 2.1 对象与方法19-21
• 2.1.1 试剂19
• 2.1.2 仪器设备19
• 2.1.3 检测方法19-21
• 2.2 结果21-22
• 2.3 讨论22-24
• 三、天津地区猪、兔、狗的HEV RNA检测24-39
• 3.1 对象和方法24-30
• 3.1.1 标本来源24
• 3.1.2 试剂来源及溶液配置24-25
• 3.1.3 主要实验仪器及生产厂家25
• 3.1.4 PCR引物设计25-26
• 3.1.5 粪便悬液制26
• 3.1.6 HEV RNA提取26-27
• 3.1.7 HEV RNA检测27-28
• 3.1.8 PCR产物的克隆、转化及测序28-29
• 3.1.9 基因序列分析及进化分析29-30
• 3.2 结果30-34
• 3.2.1 天津狗粪便悬液HEV RNA检测30
• 3.2.2 天津兔粪便悬液HEV RNA检测30-31
• 3.2.3 天津猪粪便悬液HEV RNA检测31-34
• 3.3 讨论34-39
• 结论39-40
• 问题和展望40-41
• 参考文献41-48
• 发表论文和参加科研情况说明48-49
• 综述 戊型肝炎病毒的研究进展49-70
• 综述参考文献63-70
• 致谢70-71
• 个人简历71

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本文编号：870264