HBV促进thapsigargin致内质网应激中CHOP mRNA的表达

发布时间：2017-09-18 04:39

  本文关键词：HBV促进thapsigargin致内质网应激中CHOP mRNA的表达

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【摘要】：研究背景肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)已经成为一个重大的公共卫生挑战,给世界造成了巨大的经济负担。HCC的发病率很高,主要分布在发展中国家。很多因素促成了这种疾病的发生,其中乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)感染是很重要的一方面。在全球范围内,HBV的慢性携带者超过3.5亿人,每年死于HBV感染的人数超过一百万。在中国,HCC通常是由HBV感染引起的。HBV感染引起大量病毒复制,并在很短的时间内产生大量的病毒蛋白质,从而影响内质网稳态并引起蛋白质的错误折叠。未折叠或错误折叠蛋白质的大量积累导致内质网应激(Endoplasmic reticulum stress, ERs),从而启动细胞内的未折叠蛋白反应(Unfolded protein response, UPR)。UPR是多个信号转导通路的总称,在哺乳动物细胞中,可以通过内质网上的三种跨膜感受器蛋白PERK、 IRE1、ATF6传递信号,启动一系列反应以缓解内质网应激状态；若应激持续进行,不能被缓解,细胞随即启动凋亡程序,这在HCC的病程进展中发挥重要的作用。本研究通过检测在内质网应激时,感染了HBV的HepG2.2.15细胞(HBV+)与未感染HBV的HepG2细胞(HBV-)中UPR信号分子的表达差异,以探讨HBV对HCC细胞系UPR信号通路基因表达的影响。研究方法分别用ATF6-spliced真核表达质粒、tunicamycin (tm)和thapsigargin (tg)处理未感染HBV的HepG2细胞(HBV-)和感染了HBV的HepG2.2.15细胞(HBV+),在处理后4小时、8小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时提取细胞总RNA。然后通过RT-PCR和qPCR方法分别检测三条未折叠蛋白反应通路,PERK、IRE1、ATF6中CHOP mRNA、Xbp-1s mRNA、ATF6 mRNA的表达变化情况。研究结果tg处理细胞后检测三种mRNA的表达水平。发现在HepG2.2.15细胞(HBV+)中,CHOP mRNA表达先升高,后保持不变；Xbp-1s mRNA在4小时升高后,持续下降；ATF6 mRNA表达水平一直较低,处于波动状态。而在HepG2细胞(HBV-)中,CHOP mRNA表达先升高,后降低;Xbp-1s mRNA在4小时升高后直到96小时都变化不大；ATF6 mRNA表达水平也一直较低。两个细胞系中CHOP mRNA (P0.05)和Xbp-1s mRNA (P0.05)的表达趋势有显著性差异。tm和ATF6-spliced真核表达质粒处理后,两个细胞系中,信号分子表达趋势差异不明显。研究结论本研究发现,tg诱导细胞发生内质网应激后,CHOP mRNA和Xbp-1s mRNA在感染了HBV的HepG2.2.15细胞(HBV+)和未感染HBV的HepG2细胞(HBV-)中的表达有显著性差异,提示HBV可能通过促进CHOP mRNA及抑制Xbp-1smRNA的表达来促进HCC细胞凋亡。
【关键词】：乙肝病毒 内质网应激 未折叠蛋白反应 thapsigargin(tg)
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7;R512.62
【目录】：

• 缩略语表4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 一. 前言10-15
• 二. 研究内容和技术路线15-16
• 三. 研究材料和研究方法16-34
• 四. 数据分析与计算方法34-35
• 五. 研究结果35-45
• 六. 讨论45-48
• 参考文献48-51
• 综述：内质网应激与癌症51-64
• 参考文献59-64
• 致谢64-65
• 个人简历65-66

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