骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠肝硬化的实验研究

发布时间：2017-09-27 00:08

  本文关键词：骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠肝硬化的实验研究

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【摘要】：目的:以标准的肝硬化大鼠为模型,探索同种异体的骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植是否对肝部分切除术(Partial hepatectomy,PH)后的大鼠残肝再生有影响,以及BMSCs移植是否对未实施PH的肝硬化大鼠有治疗作用,并观察移植的BMSCs在肝内的定植和归巢情况。方法:1.复合因素法(40%CCl4橄榄油溶液腹腔注射、10%酒精含量的白酒溶液为唯一饮用水、高脂低蛋白饲料)建立大鼠肝硬化模型,以肝脏组织学切片判断肝硬化建模是否成功,生化和IV型胶原(Collegen IV,IV-Co)检测了解成模时大鼠整体情况。2.手术获取2周龄大鼠的骨髓,全骨髓贴壁法分离培养BMSCs,流式细胞仪和免疫荧光检测BMSCs表面抗原(CD29、CD34、CD44、CD90),体外对细胞进行CM-Dil标记,检测标记率和标记后细胞成活率。3.成模大鼠随机分为:A组,肝部分切除术+BMSCs移植组(n=18):行38%肝切除+术中门静脉移植BMSCs lml(1×106个);B组,肝部分切除术组(n=18):行38%肝切除+术中门静脉移植PBS lml;C组,细胞移植组(n=24):开腹门静脉移植BMSCs lml(1×106个);D组,对照组(n=23):开腹门静脉移植PBS lml;术后普通饮食,C、D组大鼠分别于术后1天、3天、7天、14天、1月、2月各组各随机处死3至4只大鼠,行血液肝功能及IV-Co检测,肝组织切片HE及Masson染色了解移植后组织病理改变,肝脏冰冻切片了解移植的bmscs肝内定植和分布情况。结果:1.复合因素法诱导8周大鼠肝硬化模型建立,he染色及masson染色均见肝内正常肝小叶结构破坏,满布纤维条索,假小叶形成。血清检测示转氨酶、胆红素及iv-co升高,白蛋白降低。2.分离培养的同种异体sd大鼠的bmscs生长良好、形态均一,呈长梭形或不规则形,以鱼鳞或旋涡状生长,免疫荧光检测cd34阳性,cd44阴性,流式细胞术检测示cd29、cd90、cd44阳性率分别为94.3%、97.5%和2.39%。细胞cm-dil标记率为99.8%,标记后细胞的存活率为96.7%。3.a、b组大鼠于术后短期内全部死亡,主要死因为腹腔严重粘连导致的肠梗阻。c组bmscs移植术后2周alt、ast、alb及iv-co开始明显改善(p0.05),术后1月tbil值开始明显下降(p0.05),较d组相比有统计学差异(p0.05)。组织病理学示:细胞移植术后,c组肝细胞坏死、脂肪变性及纤维化程度等逐步改善,至术后2月肝纤维化laennec评分相比较差异有显著性(p0.05)。4.c组大鼠bmscs移植术后1天,示踪提示荧光主要出现在肝内汇管区。术后1周,荧光主要出现在纤维隔附近。术后2周,荧光主要出现在肝小叶内部。术后1月,荧光散在出现在肝小叶内部。术后2月,荧光散在出现在肝小叶内部,但强度减弱。d组大鼠所有时间点均未见荧光。结论:1.同种异体骨髓间充质干细胞移植能改善肝硬化大鼠的肝功能和减轻肝脏的纤维化程度。2.CM-Dil标记技术能示踪干细胞移植进入体内后的分布和研究干细胞的归巢。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 肝硬化 肝纤维化 细胞移植 细胞治疗
【学位授予单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.2
【目录】：

• 致谢4-5
• 摘要5-8
• Abstract8-13
• 前言13-16
• 第一部分 大鼠肝硬化模型的建立16-30
• 材料16-17
• 方法17-20
• 结果20-26
• 讨论26-29
• 小结29-30
• 第二部分 大鼠骨髓间充质干细胞的制备30-42
• 材料30-31
• 方法31-34
• 结果34-38
• 讨论38-41
• 小结41-42
• 第三部分 骨髓间充质干细胞移植42-60
• 材料42
• 方法42-46
• 结果46-55
• 讨论55-59
• 小结59-60
• 全文结论60-61
• 参考文献61-66
• 综述：干细胞移植治疗肝硬化的研究进展66-77
• 参考文献73-77
• 附录77-78
• 个人简历78

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