静脉注射壳聚糖对大鼠肝纤维化的治疗作用
本文关键词：静脉注射壳聚糖对大鼠肝纤维化的治疗作用
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【摘要】：研究目的 针对壳聚糖特有的理化性质以及当前临床上并无治疗肝纤维化的有效药物特点[1]。本文以四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型，探讨壳聚糖对肝纤维化大鼠的治疗作用，为临床治疗肝纤维化提供备选药物。 研究方法 选用SD雄性大鼠100只随机取出15只做空白对照组，剩余85只为CCl4给药组。采用腹腔注射CCl4和大豆油混合液复制肝纤维化模型。随机选择空白对照组大鼠3只，CCl4组大鼠5只观察大鼠肝组织表面变化，检测血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和碱性磷酸酶（ALP）的含量以及肝组织内α-SMA总蛋白和COL3mRNA的表达量，检验肝纤维化模型的成功。将余下80只四氯化碳组大鼠随机分5组，分别为模型组、阳性对照组（甘利欣组）、12.5mg/kg壳聚糖（低剂量组）、25mg/kg壳聚糖（中剂量组）、37.5mg/kg壳聚糖（高剂量组）5组。随后将6组统一采用尾静脉注射方式每天一次连续给药28天，在给药7天、14天、21天和28天后分别进行标本采集，检测血清中ALT、AST和ALP的水平，采用HE染色法常规病理切片，观察肝组织改变情况；通过Western Blot检测肝组织内α-SMA总蛋白含量，利qRT-PCR检测肝组织COL3mRNA的表达量。 研究结果 壳聚糖连续尾静脉注射7天、14天、21天和28天分别检测大鼠血清中ALT、AST、ALP水平。与模型组比较，其明显降低，并且低剂量壳聚糖组效果最好。从病理切片可以看出，模型组随时间变化大鼠肝组织炎症浸润明显，胶原纤维明显增多，壳聚糖组和甘利欣组随着时间变化逐渐好转，并且低剂量壳聚糖组好转最明显。Western Blot结果，模型组大鼠肝组织中α-SMA总蛋白含量升高，壳聚糖各组肝组织中α-SMA总蛋白含量均低于模型组，且壳聚糖低剂量组中α-SMA总蛋白含量最低。qRT-PCR结果发现，壳聚糖可下调COL3的mRNA的表达，，壳聚糖和甘利欣组大鼠肝组织中COL3mRNA的表达与模型组相较明显降低，且静脉给予壳聚糖的浓度越大，肝组织中COL3mRNA的表达越多。 研究结论 静脉注射壳聚糖对大鼠肝纤维化有明显治疗作用，其中12.5mg/kg的壳聚糖对大鼠肝纤维化的治疗效果最好。静脉注射壳聚糖可通过降低血清中ALT、AST、ALP的浓度，抑制肝组织中α-SMA总蛋白的表达，下调肝组织中COL3的mRNA的表达，缓解肝纤维化进程。
【关键词】：肝纤维化 壳聚糖 尾静脉注射 α-SMA COL3mRNA
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575.2
【目录】：
- 中文摘要4-6
- Abstract6-8
- 中英文缩写对照8-12
- 第一章 文献综述12-28
- 1.1 肝纤维化产生机制12-16
- 1.1.1 肝内组织细胞的激活13-15
- 1.1.1.1 枯否细胞13
- 1.1.1.2 肝星状细胞13-14
- 1.1.1.3 其他细胞14
- 1.1.1.4 细胞外基质14-15
- 1.1.3 细胞因子15-16
- 1.2 肝纤维化诊断16-17
- 1.3 肝纤维化治疗17-18
- 1.3.1 细胞保护与细胞因子类药物17
- 1.3.2 作用于 ECM 类药物17
- 1.3.3 中药治疗17-18
- 1.3.4 基因治疗18
- 1.4 壳聚糖的研究进展18-20
- 1.4.1 甲壳质的发现与分布18
- 1.4.2 壳聚糖的结构与理化性质18-20
- 1.5 壳聚糖的应用进展20-28
- 1.5.1 生物技术方面20-21
- 1.5.2 医药卫生方面21-24
- 1.5.3 日常用品方面24-25
- 1.5.4 农业方面25-26
- 1.5.5 应用于工业与环保方面26-28
- 第二章 材料与方法28-34
- 2.1 实验材料28-30
- 2.1.1 实验动物28
- 2.1.2 实验仪器28-29
- 2.1.3 实验药品29
- 2.1.4 引物序列29-30
- 2.2 实验方法30-33
- 2.2.1 大鼠肝纤维化模型的构建30
- 2.2.2 给药方法30
- 2.2.3 标本采集30
- 2.2.4 血液中 ALT、AST 和 ALP 的水平检测30-31
- 2.2.5 肝组织纤维化程度检测31
- 2.2.6 肝组织 α-SMA 的定量表达检测31
- 2.2.7 肝组织中Ⅲ型胶原酶的表达检测31-33
- 2.3 统计学处理33-34
- 第三章 实验结果34-48
- 3.1 大鼠肝纤维化模型构建34-35
- 3.1.1 肝组织外观形态34
- 3.1.2 大鼠血清中 ALT、AST、ALP 的变化34-35
- 3.1.3 大鼠肝组织中 α-SMA 与 COL3mRNA 的表达35
- 3.2 静脉注射壳聚糖对大鼠肝纤维化的影响35-48
- 3.2.1 大鼠的表观形态特征与体重变化35-37
- 3.2.2 血清中 ALT、 AST 和 ALP 的变化37-41
- 3.2.3 大鼠肝组织 HE 染色结果41-42
- 3.2.4 壳聚糖对 CCl4诱导大鼠肝纤维化中 ɑ-SMA 表达影响42-45
- 3.2.5 壳聚糖对 CCl4诱导大鼠肝纤维化中 COL3 的 mRNA 表达影响45-48
- 第四章 讨论48-52
- 第五章 结论52-53
- 参考文献53-59
- 致谢59
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