亮氨酸改善非酒精性脂肪性肝病的机制研究

发布时间：2017-09-29 18:13

  本文关键词：亮氨酸改善非酒精性脂肪性肝病的机制研究

  更多相关文章： 非酒精性脂肪性肝病 亮氨酸 脂代谢 抗氧化能力 炎性因子 胰岛素抵抗 瘦素通路

【摘要】：近年来,非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的发病率在全球范围内呈快速增长。NAFLD是代谢综合征的组成部分,其发病机制尚未完全明确,Day等提出了二次打击学说,胰岛素抵抗、瘦素抵抗以及氧化应激等在其中发挥重要作用。NAFLD目前尚无理想的防治药物。研究表明慢性肝病患者体内支链氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸)水平显著低于非肝病的对照组,提示支链氨基酸对于慢性肝病有一定的改善作用。因此,进一步研究支链氨基酸,尤其是亮氨酸对非酒精性脂肪性肝病的作用及机制是十分必要的。目的:研究不同剂量亮氨酸对NAFLD的影响,并围绕二次打击学说相关的因素探讨其可能的作用机制。方法:1.NAFLD模型的建立及亮氨酸对肝脏脂肪变性的直接作用:5周龄雄性SD大鼠48只随机分为4组,高脂组饲料参照Harlan实验室开发的60%高脂饲料配方,干预组在高脂饲料基础上分别添加1.5%、3%、4.5%的亮氨酸,喂养16周。每周记录大鼠体重、摄食量。实验结束时,观察大鼠肝组织病理学改变,测定血清肝功能指标丙氨酸转移酶(ALT)和门冬氨酸转移酶(AST)水平。2.亮氨酸对NAFLD模型大鼠糖脂代谢、氧化应激以及炎症因子的影响:16周实验结束时,测定大鼠血清空腹血糖以及空腹胰岛素(FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。测定大鼠肝糖原,血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)等脂代谢指标水平,总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)等氧化指标以及大鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和C反应蛋白(CRP)的水平。Western blot检测肝、脂肪代谢相关蛋白固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)以及肾周白色脂肪组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达水平。3.亮氨酸对NAFLD模型大鼠瘦素通路的影响:16周实验结束时,测定大鼠血清瘦素水平。取下丘脑免疫组化法测定其瘦素受体表达。Western blot法进一步检测白色脂肪组织中瘦素受体表达以及JAK2、STAT3和SOCS3等瘦素信号通路相关蛋白的表达。结果:1.NAFLD模型的建立及亮氨酸对肝脏脂肪变性的直接作用:(1)干预16周后,4组大鼠的体重、平均摄食量和主要脏器指数之间无显著性差异。(2)肝组织病理切片观察到高脂组大鼠肝脏呈现明显的脂肪变性,证实本研究中高脂喂养建立了NAFLD的大鼠模型。亮氨酸的干预则逆转了脂肪变性。同时,亮氨酸的干预也显著降低了高脂组升高的大鼠血清ALT、AST水平。2.亮氨酸对NAFLD模型大鼠糖脂代谢、氧化应激以及炎症因子的影响:(1)亮氨酸组较高脂组FINS水平均显著降低,但3个亮氨酸组之间无显著性差异;亮氨酸的干预显著降低了高脂组HOMA-IR指数。(2)干预16周后,4组大鼠的肝糖原之间的差异无显著性,3个剂量的亮氨酸干预都显著降低了大鼠血清TC、TG和LDL-C水平,3.0%和4.5%亮氨酸显著升高肝脏T-SOD和GSH-Px水平,4.5%亮氨酸还显著降低了肝脏MDA水平。(3)高脂组大鼠肝组织中SREBP1蛋白表达量由于亮氨酸的干预显著降低,而肾周白色脂肪组织中的PPARγ蛋白表达量则在亮氨酸的作用下显著上升。3.亮氨酸对NAFLD模型大鼠瘦素通路的影响:(1)单纯高脂组和添加亮氨酸3组的血清瘦素水平分别为2.31±0.23,1.69±0.26,1.87±0.27和1.91±0.29 ng/m L,亮氨酸组显著低于高脂组,且亮氨酸组之间无显著性差异。(2)免疫组化染色结果显示,4组大鼠肝组织瘦素受体的相对含量为22.70±3.21,54.33±3.06,39.50±2.08和36.00±3.51。亮氨酸组的相对含量均显著高于高脂组,其中1.5%亮氨酸组效果最为显著。和肝脏相似,亮氨酸组的大鼠下丘脑的瘦素受体也高于对照组。(3)亮氨酸的干预显著升高了高脂组大鼠下丘脑中瘦素受体蛋白和肾周白色脂肪组织中JAK2和STAT3的表达量。降低了SOCS3的表达量。其中,1.5%亮氨酸组效果最好。结论:1.亮氨酸能够改善肝脏功能以及肝脏脂肪变性,从而具有改善非酒精性脂肪性肝病的作用。2.亮氨酸改善了高脂喂养的大鼠的糖脂类代谢、提高抗氧化能力、降低血清及组织中的炎性因子。3.亮氨酸降低血中瘦素水平,增加中枢和外周组织瘦素受体和JAK2、STAT3等瘦素信号通路相关的蛋白表达,同时降低起负反馈调节作用的SOCS3蛋白表达。提示亮氨酸能改善瘦素抵抗。4.总之,亮氨酸能够改善非酒精性脂肪性肝病,其可能机制是抑制了对肝脏的二次打击,即改善胰岛素抵抗和瘦素抵抗、提高机体抗氧化能力、降低炎性因子。本研究侧重于亮氨酸预防非酒精性脂肪性肝病及其机制的探讨,但从指标来看,亮氨酸同样对2型糖尿病、心血管疾病、代谢综合征的危险因子也起到了预防作用。
【关键词】：非酒精性脂肪性肝病 亮氨酸 脂代谢 抗氧化能力 炎性因子 胰岛素抵抗 瘦素通路
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575.5
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 引言11-13
• 第一部分 NAFLD模型的建立及亮氨酸对肝脏脂肪变性的直接作用13-21
• 1. 材料与方法13-17
• 2 结果17-20
• 3.讨论20-21
• 第二部分 亮氨酸对NAFLD模型大鼠糖脂代谢、氧化应激以及炎症因子的影响 .. 1121-33
• 1. 材料与方法21-26
• 2 结果26-29
• 3.讨论29-33
• 第三部分 亮氨酸对NAFLD模型大鼠瘦素通路的影响33-42
• 1. 材料与方法33-35
• 2.结 果35-39
• 3.讨论39-42
• 结论42-43
• 参考文献43-49
• 综述49-56
• 参考文献53-56
• 攻读硕士学位期间发表的文章及科研经历56-57
• 英文缩略词表57-58
• 致谢58-60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 姜玲玲,厉有名,黄伟,周华丽;非酒精性脂肪肝及其危险因素调查[J];中国公共卫生;2005年03期

2 陈世清;黎华;刘杞;;高脂饮食对大鼠脂肪肝胰岛素受体底物1、2表达的影响[J];中国糖尿病杂志;2008年07期

，

本文编号：943487