DHA调控Kupffer细胞极化途径缓解NAFLD炎性损伤

发布时间：2017-10-01 15:14

  本文关键词：DHA调控Kupffer细胞极化途径缓解NAFLD炎性损伤

  更多相关文章： 非酒精性脂肪性肝 DHA PA 巨噬细胞极化 M1 M2细胞表型 核转录因子kappa B

【摘要】：目的:探讨DHA缓解NAFLD肝细胞炎性损伤的可能机制。方法:SD雄性大鼠144只,随机均分为3组:正常对照组(常规饲料,CON组)、NASH模型组(高脂饲料,HF D组)、鱼油干预组(高脂+鱼油饲料,FOH组)。分别在第4周、8周、12周、16周处死大鼠,肉眼观察肝脏形态变化,试剂盒检测血脂指标(TC、TG、HDL、LDL)和肝功能指标(ALT、AST),石蜡切片做HE染色、Masson染色观察肝细胞内脂质聚集及炎性浸润情况。Real Time-PCR检测肝组织炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-a以及KCs M1型标志分子CD197、CD11c和M 2型标志分子CD163、CD206的m R NA表达水平;免疫组化检测巨噬细胞KCs表型分子F4/80、CD11b、CD206表面蛋白的表达。以小鼠单核/巨噬细胞R AW 264.7作为研究对象,MTT实验确定软脂酸钠(PA)诱导细胞极化的最适浓度和时间;细胞处理分5组:正常对照组(C ON)、PA组、DHA干预组(DHA+PA)、IFN-γ+LP S组(M1组),以及IL-4组(M2组),每组六个平行;显微镜观察各组细胞形态变化;Realtim e P CR检测PPARγ、NF-κB,炎性细胞因子IL-1β、TNF-α,M 1型标志细胞因子:IL-6、CD11c、i NOs以及M2标志细胞因子:IL-10、CD206、Arg1等基因表达;ELISA法检测细胞上清中TNF-α、IL-6和IL-10的分泌量;FCM检测表面蛋白F 4/80以及CD16/32、CD206的蛋白表达情况。结果:HFD组大鼠饲喂4周出现肝脏出现大量脂质聚集,血TC、TG显著高于CON组和FOH组大鼠;8周,HE染色和Masson染色显示HFD组肝细胞炎性浸润明显,血脂及肝功能指标都显著升高,高脂饲喂SD大鼠发生NAS H明显。至16周,HFD组大鼠肝组织炎性细胞聚集明显,肝纤维化严重,FOH组和CON组少见炎性浸润和肝纤维化。Real Time-PCR检测肝组织中IL-1β、IL-6、TNF-α结果显示FOH组显著低于HFD组,HFD鼠肝组织CD197、CD11c表达显著升高,而FOH组的CD163、CD206升高明显。PA最佳干预浓度为100μm ol/L,时间48h;镜下可观察到IFN-γ+LPS组和PA组细胞形态呈现较多的梭型或多角型,并有多个突起呈不规则形状,而IL-4组和DHA干预组细胞形态多为圆润透亮,且细胞数相对于PA组较多;与正常对照组细胞相比,荧光定量检测结果显示,IFN-γ+LPS组和PA组的IL-1β、TNF-α、NF-κB P 65以及M1型标志因子IL-6、i Nos、CD11c的表达都显著增加,而IL-4组和DHA干预组的IL-10、CD206、Arg1等具有抑炎作用的M2型细胞因子表达显著上升;FCM检测的IFN-γ+LPS和PA组中CD16/32蛋白表达显著性增加,IL-4组和DHA干预组中CD2 06有所增加,但无显著性差异。结论:高脂饲喂8周的HFD组大鼠发生NASH病变。不同于HFD组,16周FOH组大鼠血脂水平及肝功能均改善明显,炎性细胞浸润不明显,炎性细胞因子及M1型标志分子的表达较低,而M2型极化标志分子表达显著升高,提示富含DHA的鱼油能够阻止高脂所致的大鼠NAFLD炎性损伤,DHA改善NAFLD炎性损伤可能与DHA调节KCs极化类型有关。
【关键词】：非酒精性脂肪性肝 DHA PA 巨噬细胞极化 M1 M2细胞表型 核转录因子kappa B
【学位授予单位】：武汉轻工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.5
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 主要缩写词11-12
• 1 绪论12-19
• 1.1 NAFLD研究进展12-13
• 1.2 KCs在炎症疾病发生过程中的作用13-15
• 1.2.1 KCs简介13
• 1.2.2 炎症发生过程中KCs的极化13-15
• 1.3 KCs与NAFLD15-16
• 1.3.1 KCs与脂质代谢15
• 1.3.2 KCs信号蛋白PPARy的变化与NAFLD15-16
• 1.4 DHA缓解非酒精性脂肪性肝炎16-17
• 1.4.1 调节细胞信号传导途径16
• 1.4.2 调节炎性介质的生成16-17
• 1.4.3 降低细胞表面分子和黏附分子表达17
• 1.4.4 对细胞因子及其功能的影响17
• 1.4.5 对细胞增殖和抗原递呈的影响17
• 1.5 本课题的研究目的与意义17-19
• 2 鱼油对NAFLD大鼠肝组织炎性损伤的影响19-43
• 2.1 前言19
• 2.2 材料与方法19-32
• 2.2.1 主要试剂19-21
• 2.2.2 主要设备仪器21
• 2.2.3 主要试剂配制21-24
• 2.2.4 实验方法24-32
• 2.3 实验结果32-42
• 2.3.1 高脂饮食对大鼠体重和肝重的影响32
• 2.3.2 各组大鼠肝功能指标的变化32-34
• 2.3.3 各组大鼠血脂的变化34-35
• 2.3.4 肝组织H&E、MASSON染色及NAFLD评分35-39
• 2.3.5 IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表达情况39-40
• 2.3.6 CD197、CD11c、CD163、CD206的mRNA表达情况40-41
• 2.3.7 CD68、CD206、CD11C蛋白表达情况41-42
• 2.4 结论42-43
• 3 DHA调控KCs极化途径的研究43-58
• 3.1 前言43
• 3.2 材料与方法43-51
• 3.2.1 主要试剂43-44
• 3.2.2 主要仪器44
• 3.2.3 主要试剂配制44-46
• 3.2.4 实验方法46-51
• 3.3 实验结果51-58
• 3.3.1 干预后RAW264.7细胞形态的改变51-53
• 3.3.2 炎性细胞因子以及M1/M2型标志基因mRNA表达情况53-54
• 3.3.3 ELISA检测培养基上清TNF-α、IL-10、IL-6浓度54-56
• 3.3.4 流式细胞术检测CD16/32、CD206蛋白表达情况56-58
• 4 讨论58-61
• 参考文献61-70
• 致谢70-71
• 攻读学位期间的研究成果71

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本文编号：954156