Grx1调节蛋白质谷胱甘肽化在酒精性肝病中的机制研究

发布时间：2017-10-07 13:08

  本文关键词：Grx1调节蛋白质谷胱甘肽化在酒精性肝病中的机制研究

  更多相关文章： 酒精性肝病 谷氧还蛋白1 谷胱甘肽化 去谷胱甘肽化 氧化应激 凋亡

【摘要】：目的:谷氧还蛋白1(Glutaredoxin1,Grx1)是一种重要的巯基转移酶,通过它的活性位点催化蛋白质的去谷胱甘肽化。它维持细胞内的氧化还原平衡,具有抗凋亡、抗氧化以及参与细胞分化等功能,其在许多疾病的发生发展中发挥着重要的作用。然而它在肝损伤及修复中的作用机制仍然是未知的。本实验以酒精性肝病模型探讨Grx1调节蛋白质谷胱甘肽化在肝损伤中的机制,以便为临床上治疗类似机制的肝损伤提供新的治疗靶点。方法:将10-14周龄的C57BL/6雄性小鼠纳入实验,Grx1-/-小鼠和WT小鼠分别被随机分为对照组(Grx1-/--Control组和WT-Control组)和实验组(Grx1-/--ETOH组和WT-ETOH组)。本实验采用的是Gao-binge模型造模方法,在灌胃9h后收集血液和肝组织。检测血清生化指标ALT和AST以及TC、TG;HE观察肝脏病理变化;油红O染色观察肝脂肪变;检测肝组织氧化应激指标:GSH/GSSG和ROS;TUNEL法检测细胞凋亡;western blot检测Grx1、Fas L、Fas、Pro-caspase3和cleaved caspase3的蛋白表达;免疫荧光检测蛋白质谷胱甘肽化(PSSG)以及PSSG与Fas的共表达;ELISA检测肝组织匀浆液的TNF-α;免疫组化检测kupffer细胞和Fas L。结果:(1)慢性酒精喂养诱导肝脏组织中Grx1蛋白表达增加(p0.001)和氧化应激,且与WT-ETOH组相比,Grx1-/--ETOH组中GSH/GSSG比值下降得更为明显(p0.05),而产生的ROS更多;(2)HE染色、油红O染色、血清生化指标(p0.05)以及TUNEL染色都表明Grx1-/--ETOH组肝损伤更重;(3)慢性酒精喂养后Fas、Fas L和Cleaved caspase3表达增加,且与WT-ETOH组相比,Grx1-/--ETOH组中Fas表达没有显著的差异(p0.05),Fas L表达反而减少(p0.05),而Cleaved caspase3表达增加(p0.01);(4)与WT-ETOH组相比,Grx1-/--ETOH组中PSSG和Fas-SSG表达均增加,这与Grx1的功能有关;(5)与WT-ETOH组相比,Grx1-/--ETOH组中TNF-α反而减少(p0.01);(6)与WT-ETOH组相比,Grx1-/--ETOH组中F4/80标记的kupffer细胞数量反而减少。结论:在敲除Grx1后,肝脏对酒精更敏感,其损伤机制可能是Grx1介导Fas去谷胱甘肽化功能失调,导致Fas-SSG表达增加,从而激活caspase3,进而导致肝细胞的凋亡。
【关键词】：酒精性肝病 谷氧还蛋白1 谷胱甘肽化 去谷胱甘肽化 氧化应激 凋亡
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-14
• 参考文献13-14
• 1 材料与方法14-24
• 2 结果24-32
• 3 讨论32-35
• 参考文献35-37
• 全文总结37-38
• 文献综述38-47
• 参考文献42-47
• 致谢47-48
• 攻读硕士学位期间发表的文章48

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本文编号：988015