Caveolin-1调节大鼠肺微血管内皮细胞接触性抑制在肝肺综合征中的作用研究

发布时间：2017-10-07 17:18

  本文关键词：Caveolin-1调节大鼠肺微血管内皮细胞接触性抑制在肝肺综合征中的作用研究

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【摘要】：背景和目的:肝-肺综合症(Hepatopulmonary syndrome,HPS)是临床上一种危重的并发症,主要包括晚期肝病、低氧血症和肺内血管扩张(intrapulmonary vaso dilatation,IPVD)等特征。其中肝硬化病人合并HPS占其总数的32%,明显增加其死亡率。到现在为止,HPS发生发展的具体机制尚未研究清楚,肝移植仍然是唯一有效的治疗措施。多种因素参与HPS的发病机制。其中肺微血管扩张促进肺微血管重塑和低氧血症。而PMVECs接触抑制减弱和增殖可能在HPS肺微血管扩张中发挥了重要作用。严重肝病致大量细胞因子如内皮素-1(Endothelin-1,ET-1),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等释放入血循环中,激活或增加引起肺微血管内皮增殖相关的信号通路中的相关蛋白的表达。然而HPS血清刺激的PMVECs接触性抑制作用发生显著减弱变化的机制尚不清楚。Caveolin-1是细胞膜表面上的重要结构和功能蛋白,在caveolin-1的N端存在一个特殊CSD结构域,这个CSD结构域能绑定多个信号蛋白调节细胞黏附、增殖、迁移及凋亡,但是Caveolin-1在慢性胆总管结扎(common bile duct ligation,CBDL)大鼠血清诱导PMVECs接触抑制减弱,促进其增殖的机制仍然不明确。我们在前期实验过程中病理解剖CBDL大鼠肺脏发现其肺部微血管发生增厚、明显扩张的表现。而用HPS大鼠血清刺激的PMVECs出现复层增长的趋势,同时其接触性抑制作用减弱。目前,在研究接触性抑制作用较多集中在肿瘤研究方面。而ve-cadherin作为细胞间黏附体结构的重要组成部分在接触性抑制方面发挥了重要的作用。Caveolin-1是细胞膜上多种信号通路如增长、凋亡等的枢纽中心,它能通过相关的信号通路调节细胞间黏附结构体的稳定性,最终对细胞接触性抑制进行调控。于是我们假设caveolin-1调节PMVECs接触性抑制大鼠在HPS的发展有可能发挥重要的作用。本实验目的在于研究HPS大鼠血清诱导下大鼠PMVECs发生接触性抑制作用减弱及探索caveolin-1调节HPS大鼠血清诱导的大鼠PMVECs接触性抑制作用减弱的机制。胆总管结扎术后胆汁性肝硬化门静脉高压症诱导大鼠hps的形成,然后,提取其血清刺激pmvecs,检测其黏附指数及caveolin-1和ve-cadherin的表达,探索hps的发病机制。方法:实验分为三部分1.建hps大鼠模型,收集血清。cbdl法构建hps大鼠模型,建模成功的标准为其腹主动脉血血气分析pao285mmhg(1mmhg=0.133kpa)且a-ado218mmhg,术后2周收集其血清。2.检测hps大鼠血清对正常sd(spraguedawley,sd)大鼠pmvecs接触性抑制作用的影响。用组织块贴壁法原代培养pmvecs。正常sd大鼠(1月龄),取肺,用生理盐水灌注后剪下其边缘1cm组织行pmvecs原代培养、纯化及鉴定。将第4-9代pmvecs随机分成2组:hps干预组(hps组)和对照组(c组),于12、24和36h(t1、t2、t3)时间点,用cck-8法分别检测pmvecs的黏附指数和增殖情况。3.于12、24和36h(t1、t2、t3)时间点用westernblot法分别检测hps组和c组中caveolin-1和ve-cadherin蛋白的表达。结果:1).hps大鼠模型构建成功,其取其腹主动脉血气分析示pao285mmhg且a-ado218mmhg并成功收集其hps鼠血清。2).原代pmvecs培养成功,hps大鼠血清降低细胞间的黏附指数,使pmvecs接触抑制作用减弱,增殖能力增高。3).与c组比较,hps组在t1、t2、t3时相点pmvecs中的caveolin-1和ve-cadherin蛋白表达均下调。结论:1.pmvecs在hps大鼠血清的刺激下,其细胞间黏附指数下降提示细胞增殖加快,PMVECs的接触性抑制作用减弱。2.HPS大鼠血清的刺激的PMVECs中的caveolin-1和ve-cadherin蛋白表达均下调,提示caveolin-1和ve-cadherin可能参与PMVECs接触性抑制作用减弱的调节。
【关键词】：HPS 血清 增殖 黏附指数 PMVECs 小窝蛋白-1 钙黏素
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575;R56
【目录】：

• 缩略语表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 肝肺综合征大鼠血清对肺微血管内皮细胞接触性抑制的影响13-26
• 2.1 构建肝肺综合大鼠模型和收集血清13-19
• 2.1.1 实验材料与方法13-16
• 2.1.2 结果16-17
• 2.1.3 讨论17-19
• 2.2 HPS大鼠血清对正常SD大鼠肺肺微血管内皮细胞接触性抑制作用的影响19-26
• 2.2.1 实验材料和方法19-21
• 2.2.2 结果21-23
• 2.2.3 讨论23-26
• 第三章 caveolin-1/ve-cadherin在肝肺综合征中大鼠血清诱导的肺肺微血管内皮细胞接触性抑制减弱作用中的研究26-31
• 3.1 材料与方法26-28
• 3.2 结果28-29
• 3.3 讨论29-31
• 全文讨论31-33
• 全文总结33-34
• 参考文献34-40
• 文献综述 接触性抑制作用的研究进展40-49
• 参考文献46-49
• 攻读学位期间的研究成果49-50
• 致谢50

【参考文献】

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1 黎尚荣;沈宁;易慧敏;甘小亮;黑子清;;肝肺综合征病人体肺循环及血浆iNOS、ET-1水平变化[J];南方医科大学学报;2009年10期

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本文编号：989091