Cajal间质细胞的自噬与慢传输型便秘之间的关系

发布时间：2017-10-07 22:20

  本文关键词：Cajal间质细胞的自噬与慢传输型便秘之间的关系

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【摘要】：目的研究慢传输型便秘(STC)发生与Cajal间质细胞自噬之间的关系方法清洁级健康雄性SD大鼠60只,体重200~250g之间,随机分2组,对照组与实验组每组各30只大鼠。实验组大鼠按照50 mg/kg盐酸小檗碱剂量以10 ml/kg的标准对各组大鼠进行连续灌胃14天,对照组大鼠以同实验组等量的生理盐水灌胃14天。14天后各组大鼠禁食16h然后使用墨汁活性炭悬液灌胃处理大鼠,通过检测墨汁灌胃后6h大鼠排便粒数,首次排黑便时间以及粪便含水量确认STC造模是否成功。鉴定造模成功后,分别通过Western Blot和免疫组化法检测两组大鼠肠内酪氨酸蛋白激酶受体(c-Kit蛋白)的表达水平以反映结肠肠道内Cajal间质细胞的变化情况。然后使用透射电镜TEM法检测实验组大鼠Cajal间质细胞内细胞自噬泡的水平并使用Western Blot法检测结肠组织自噬相关标志蛋白Beclin-1,LC3的表达变化。最后使用流式细胞法和免疫荧光法相结合来检测大鼠肠道肌群中ICCs细胞内Ca2+离子的浓度变化。试验中采用统计软件SPSS16.0对实验数据进行分析,组间数据两两比较采用LSD-t检验。以P0.05为结果具有统计学差异。结果1灌胃后实验组大鼠体重与对照组比较,差异无统计学意义。通过墨汁灌胃后6h大鼠排便粒数,首次排便时间以及粪便含水量的检测结果显示,50 mg/kg盐酸小檗碱灌胃14天后,实验组大鼠的粪便粒数和粪便含水量均降低,两组数据间差异有统计学意义(P0.05),同时,实验组大鼠的首次排黑便时间延后(P0.05),表明大鼠肠道传输功能受阻,体现了慢传输型便秘的症状。结果显示使用盐酸小檗碱造大鼠慢传输型便秘模型成功。2免疫组化法检测大鼠肠道组织结果表明,实验组大鼠肠道内Cajal间质细胞形态发生明显变化且细胞数量有所降低,与对照组相比数据间差异有统计学意义(P0.05)。Western Blot法检测大鼠肠道内蛋白表达的结果表明,实验组与对照组相比,大鼠肠道内c-Kit蛋白表达明显减少。结果表明盐酸小檗碱引发Cajal间质细胞的变化可能是导致大鼠慢传输型便秘的原因。3透射电镜TEM检测大鼠Cajal间质细胞内自噬泡水平的结果表明,实验组大鼠肠道内Cajal间质细胞自噬泡形成,与对照组相比其差异具有统计学意义(P0.05)。Western Blot法检测Cajal间质细胞内自噬标志蛋白的结果表明,Cajal间质细胞自噬蛋白Beclin-1,LC3表达均显著上调,表明大鼠慢传输型便秘的发生可能与Cajal间质细胞的过度自噬导致的自噬性死亡有关。4通过流式细胞法和免疫荧光法,以Ca2+荧光指示剂检测法检测ICCs中游离Ca2+离子的浓度变化的结果显示,慢传输型便秘大鼠模型中Cajal间质细胞细胞内游离Ca2+离子升高,Ca2+离子升高可能是导致Cajal间质细胞自噬性死亡的原因。结论1慢传输型便秘大鼠模型中大鼠肠道内Cajal间质细胞的形态萎缩并且数量减少。2慢传输型便秘大鼠模型肠道内Cajal间质细胞发生了明显的细胞自噬现象,这可能是引发Cajal间质细胞数量减少从而导致慢传输型便秘的成因之一。3慢传输型便秘大鼠模型中Cajal间质细胞细胞内游离Ca2+离子升高,Ca2+离子升高可能是导致Cajal间质细胞自噬性死亡的原因。
【关键词】：慢传输型便秘 Cajal间质细胞 细胞自噬
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R574.62
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略表10-11
• 引言11-13
• 第1章 实验研究13-40
• 1.1 材料与方法13-20
• 1.1.1 实验动物13
• 1.1.2 主要试剂13-14
• 1.1.3 主要仪器14
• 1.1.4 主要液体配制14-15
• 1.1.5 慢传输型大鼠（STC）便秘模型的建立与鉴定15-16
• 1.1.6 免疫荧光检测大鼠结肠ICC变化16-17
• 1.1.7 透射电镜检测结肠ICC变化17-18
• 1.1.8 STC大鼠ICCs中的钙离子浓度检测18-20
• 1.1.9 统计分析方法20
• 1.2 结果20-29
• 1.2.1 慢传输型便秘大鼠模型的建立和鉴定20-22
• 1.2.2 慢传输型便秘大鼠肠道ICCs形态观察与c-Kit蛋白的表达鉴定22-24
• 1.2.3 慢传输型便秘大鼠ICC细胞自噬情况鉴定24-27
• 1.2.4 STC大鼠ICCs中的钙离子浓度检测27-29
• 1.3 讨论29-36
• 1.3.1 STC与ICCs29-32
• 1.3.2 细胞自噬调控32-34
• 1.3.3 STC与ICCs自噬作用间的关系34-36
• 1.4 结论36
• 参考文献36-40
• 第2章 综述40-48
• 2.1 ICCss概述40-43
• 2.1.1 ICCs40
• 2.1.2 ICCs的形态学及组织学特征40-41
• 2.1.3 ICCs的分布41
• 2.1.4 ICCs控制胃肠道动力的机制41-43
• 2.3 ICCs与自噬43-44
• 2.4 结语与展望44
• 参考文献44-48
• 结论48-49
• 致谢49-50
• 导师简介50-51
• 作者简介51-52
• 学位论文数据集52

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本文编号：990391