Notch信号通路诱导人胚胎干细胞定向分化为肝胆管细胞的研究

发布时间：2017-10-08 22:45

  本文关键词：Notch信号通路诱导人胚胎干细胞定向分化为肝胆管细胞的研究

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【摘要】：[目的]Notch信号作为一种在进化中高度保守的反映细胞间传导机制的通路,它维持着细胞的增殖、分化和凋亡,在胚胎发育和细胞分化命运的决定中发挥重要的作用。我们的目的就是探寻Notch信号通路在肝胆管细胞分化中所起的作用。[方法]将hESC株H1‘细胞接种到Matrigel包被的培养板上,加入含有细胞因子活化素A (Activin A)的分化液诱导5d。由activin A处理得到的DE细胞分别在含20ng/mlBMP4,100ng/mlFGF1的培养体系和20ng/mlBMP4, 100ng/mlFGF1, Notch抑制剂NAPT的培养体系中处理5天。采用免疫细胞化学染色、RT-PCR反应鉴定分化细胞的性质,胆管细胞的分化以及notch信号通路中的相关受体和基因的表达情况。[结果]实验发现50-100个细胞左右的hES团块是理想的分化细胞量,这样大小的hES团块同时具有较强的增殖能力和分化能力。noggin能有效的抑制hES细胞分化为DE细胞。hES来源的DE细胞表达notch信号通路中的相关受体notch1, notch2及下游活化基因hesl, hes5。而这些notch信号分子在BMP-4和FGF-1作用3天后表达下降或消失。在向肝胆管细胞的分化体系中加入Notch信号通路的抑制剂后,发现有部分DE细胞发生凋亡或死亡,残存的细胞Notch信号胞内下游蛋白(NICD)表达明显下降,而且大部分蛋白分布在胞浆内,并未转移至核内,说明NICD未处于激活状态；相反,对照组(FGF-1、BMP-4)NICD荧光强度要明显高于实验组,且NICD主要分布在核内,表明NICD处于激活状态；与此同时,notch抑制剂作用5天后,与对照组相比,实验组肝细胞的生成率明显降低,甚至检测不到。[结论]1.hES细胞在高浓度activin A和低浓度血清的诱导下可定向分化得到高比率的DE细胞；而用noggin可抑制hES向DE细胞分化。2.hES细胞的分化密度与DE的形成效率密切相关。3.FGF-1和BMP-4可有效地促使DE细胞向胆管上皮细胞的分化。4.Notch信号通路决定DE细胞的胆管细胞发生。
【关键词】：Notch信号通路 人胚胎干细胞 分化 肝胆管细胞
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575
【目录】：

• 缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-14
• 材料与方法14-25
• 结果25-34
• 讨论34-40
• 结论40-41
• 参考文献41-46
• 综述46-54
• 参考文献51-54
• 攻读学位期间获得的学术成果54-55
• 致谢55

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本文编号：996700