糖尿病大鼠角膜超微结构的变化及角膜上皮损伤修复过程中紧密连接蛋白occlud

  本文关键词：糖尿病大鼠角膜超微结构的变化及角膜上皮损伤修复过程中紧密连接蛋白occludin重塑的特点，由笔耕文化传播整理发布。

《安徽医科大学》 2015年

糖尿病大鼠角膜超微结构的变化及角膜上皮损伤修复过程中紧密连接蛋白occludin重塑的特点

黄晨晨  

【摘要】：目的探讨糖尿病大鼠和正常大鼠角膜超微结构的变化及角膜上皮修复过程中紧密连接蛋白occludin重塑的特点。方法100只SD大鼠随机分为糖尿病组和正常组各50只(糖尿病组均高脂喂养),通过腹腔注射STZ诱导形成Ⅱ型糖尿病大鼠模型,于造模成功3个月后,将糖尿病大鼠和正常大鼠先用4mm的中央角膜环钻标记,然后用钝的眼科手术刀片去除标记内的角膜上皮,形成创伤。于损伤后0h(未损伤)、16h、48h、72h、120h(每组每个时间点各5只)处死大鼠取角膜。观察糖尿病大鼠和正常大鼠角膜上皮的超微结构;间接免疫荧光和Western blot分析occludin蛋白在损伤修复过程中的变化。结果1.正常大鼠与糖尿病大鼠体重的比较,在高脂喂养4周后(注射STZ之前)正常对照组大鼠平均体重(370g)较糖尿病大鼠(400g)低7.5%(P0.01),但在第16周时糖尿病大鼠的平均体重(410g)较正常对照组大鼠(510g)低19.6%(P0.01)。在高脂喂养4周后(注射STZ之前)正常对照组空腹血糖值约为4mmol/l,糖尿病组约为6mmol/l,但在第16周时糖尿病大鼠的空腹血糖值约为20mmol/l(P0.05),正常对照组的血糖值仍为5mmol/l(P0.01)。2.角膜上皮创伤修复观察,正常对照组在术后16h和24h的损伤愈合率达55%和84%,(P0.01)而糖尿病组在术后16h和24h的损伤愈合率为34%和56%(P0.01)。糖尿病大鼠的角膜损伤愈合率较正常对照组大鼠有明显的延迟3.电镜下观察糖尿病大鼠角膜上皮可见大量片状剥脱,上皮细胞间隙增大,细胞连接松弛;上皮表面微绒毛数量减少,可见水肿和断裂脱落。正常大鼠角膜上皮平坦,细胞间连接紧密;角膜上皮表面微绒毛排列和密度良好,无水肿和断裂现象。4.HE染色观察大鼠在角膜上皮去除术前正常对照组大鼠的角膜上皮为多层上皮细胞,在上皮去除术后16h和48h,可以观察到单层或多层角膜上皮细胞覆盖在缺损表面的边缘,72h时角膜上皮的重建已经完成。糖尿病大鼠在角膜上皮去除术前其角膜上皮基底细胞和基质层水肿,上皮去除术后16h时缺损表面仍没有被覆盖,在上皮去除术后48h和72h时可以观察到较正常对照组只有少量的角膜上皮细胞覆盖在上皮的缺损处。5.免疫荧光检测角膜上皮发现,occludin蛋白分布在表层角膜上皮细胞的边缘。角膜上皮未去除时糖尿病组和正常组之间未观察到有明显的差别。角膜上皮去除16h后,可以观察到糖尿病组角膜上皮occludin表达较正常组明显更弱,且排列不规则。角膜上皮去除48h后,可以观察到糖尿病角膜上皮occludin的表达较糖尿病组16h时明显增强,排列也更规则,但仍比48h时正常组occludin的表达低。角膜上皮去除后72h,两组occludin的表达都更规则与未损伤时无明显差别。在角膜上皮去除120h后,两组间未观察到明显区别。6.通过Western blot观察occludin蛋白的表达。观察未损伤大鼠的角膜上皮occludin的表达发现正常对照组和糖尿病组之间的表达量无明显的差别(P0.05)。在角膜上皮去除术后16h和48h可明显观察到糖尿病组大鼠的角膜上皮occludin表达量明显低于正常对照组的表达量(P0.05)。在角膜上皮去除术后72h和120h两组大鼠的occludin表达量没有明显的区别(P0.05)。结论糖尿病可影响大鼠角膜上皮创伤修复过程中紧密连接蛋白occludin蛋白的表达。

【关键词】：
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2;R772.2
【目录】：

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