翼状胬肉进行期与静止期MMP-9和VEGF的表达及其相关性研究

  本文关键词：翼状胬肉进行期与静止期MMP-9和VEGF的表达及其相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

        研究背景翼状胬肉是一种慢性炎症性病变,为睑裂部球结膜纤维血管组织呈三角形增生而侵犯角膜的一种疾病,因形状状似昆虫翅膀而得名。翼状胬肉是临床上最常见的眼科疾病之一,发病率高,术后复发率也高,在其发生及发展中不仅引起眼部刺激症状、影响美观,还可影响视力；如翼状胬肉较大时,还可限制眼球运动。翼状胬肉发生后可分为进行期和静止期,二者的生物学行为差别较大。在翼状胬肉发生后胬肉组织可长时间内处于类似休眠状态的静止期,不发展,胬肉菲薄、血管组织少、头端无浸润带,部分患者此其可长达10余年而很少出现眼部刺激症状及视力下降；而一旦某些促发因素影响,胬肉进入进行期,胬肉组织则进展快速,胬肉充血、肥厚某些,大量纤维血管组织增生,头端可见浸润带,此期对角膜破坏迅速、视功能受到严重的威胁及损害。翼状胬肉的进行期及静止期可以交替出现,相互转化。翼状胬肉一旦发生即不会自行消退,只会在进行期和静止期之间互相转化,但对于翼状胬肉在进行期和静止期如何转化及具体机制目前在国内仍很少人研究,在国外研究也较少,目前国内外研究主要集中在探讨翼状胬肉发病机制方面。在组织学上,翼状胬肉是由萎缩的结膜上皮和增生肥大的血管化组织及弹性退变结缔组织构成。近年来的研究表明,翼状胬肉更趋向是一种组织增生性疾病,并可能与细胞的增殖和凋亡有关。翼状胬肉组织的超微结构研究表明,弹性纤维和胶原纤维的增生和变性是翼状胬肉较为突出的病理改变,临床表现为新生组织的不断生长、增厚,并逐渐侵入角膜,手术切除后容易复发,此特点与肿瘤组织相似,即翼状胬肉具有肿瘤样的生物学特性,而肿瘤的发生及发展的重要原因是细胞异常增殖和凋亡失衡。肿瘤血管的生成在肿瘤生长和演进过程中至关重要,若没有新生血管长入,一个肿瘤克隆灶不会超过2mmm3。微血管的生成和肿瘤样组织的持续性生长及侵袭、转移密切相关,受到一些基质水解酶的影响,病变组织除分泌相关基质金属蛋白酶降解基底膜外还通过分泌促血管生成因子、激活VEGF。同时,大量国内外研究也发现翼状胬肉组织存在基质金属蛋白酶和血管内皮生长因子的表达率均较正常结膜组织的表达率要明显增高、细胞异常增殖且凋亡失衡等改变。基质金属蛋白酶(MMP)是一类含锌的中性内肽酶,能修建或降解细胞外基质的酶家族,在胚胎发育、组织重建、伤口愈合、血管生成、肿瘤的侵袭转移等多种生理病理过程中发挥着重要作用。在体内,MMP的活性受到a2-巨球蛋白、金属蛋白酶抑制剂等内源性抑制因子的严密调节。MMP与金属蛋白酶抑制剂之间的平衡状态的维持对于组织结构连接的降解和重塑程度具有重要作用。到目前为止,相关研究已发现20多种人基质金属蛋白酶。根据其结构和特异性底物分为以下几类：胶原酶类、明胶酶类、基质水解酶类、膜型基质金属蛋白酶类等。其中MMP1属于胶原酶类,MMP9属于明胶酶类。大量研究发现,MMP在胬肉组织中的表达强于正常结膜组织,这提示胬肉组织中成纤维细胞的异常增生及新生血管生成过程中,涉及到细胞外基质的降解和重建可能是MMP所致,MMP1仅仅只破坏1型胶原,而MMP9不仅可以破坏2型胶原,还可以破坏突变的胶原,最终可以导致胶原的完全破坏和成纤维细胞侵入。VEGF是调控血管生成的关键因子,分子量为34-45KD,其序列高度保守,广泛分布于人和动物体内的大脑、肾脏、肝脏、脾脏、胰腺和骨骼等组织中。它是最直接的血管内皮细胞分裂素,并且作为血管生成旁分泌刺激因子而被分泌。VEGF是目前研究发现的功能最强的血管形成促进因子。它可以特异性地刺激血管内皮细胞的有丝分裂、促进血管形成、抑制血管内皮细胞凋亡、诱导血管平滑肌细胞的迁移,促进血管平滑肌细胞的合成和分泌基质金属蛋白酶、家属基质降解及趋发炎症细胞。同时,它还可以增强微血管的通透性,促使血管内大分子物质溢出,从而有利于血管外基质的形成,为血管内皮细胞的迁移及血管形成提供物质支架,并最终促使新毛细血管生成并促进其功能的成熟。有研究表明,血管的生长和成熟是高度复杂和协调的过程。在正常生理性血管生长的过程中,如胚胎形成、骨骼生长等,VEGF信号代表重要的限制酶。在病理情况下,可出现VEGF的异常表达。在紫外线照射下,VEGF表达上调,通过对血管内皮细胞强烈的有丝分裂作用,促进新生血管形成,尤其是微血管的通透性,引起血浆蛋白的渗漏到细胞外基质,在细胞外沉积,为成纤维细胞核血管内皮细胞的迁入提供条件基质,为翼状胬肉细胞的生长和新生毛细血管网的建立提供营养。然而,MMP-9与VEGF也存在密切联系。目前认为MMP-9与VEGF在肿瘤组织血管发生中是最重要的促进因子,二者的过度表达可作为肿瘤血管发生的指标。Riedel F.等认为MMP-9与VEGF在肿瘤的发生发展中可能发挥了协同作用。而Poyer F.等发现MMP-9与VEGF间存在着一个自分泌系统,二者互相调节促进对方的分泌。目的分析翼状胬肉进展过程的相关因子的表达差异了解其中的机制,为治疗提供理论基础。方法本研究收集2011年4至7月期间在我院诊断为原发性翼状胬肉,并行翼状胬肉切除+球结膜覆盖术的翼状胬肉标本20例(进展期)及20例(静止期),将标本石蜡固定、切片,采用免疫组织化学技术检测MMP-9和VEGF在翼状胬肉进展期与静止期中的表达。结果翼状胬肉组织中MMP-9阳性表达呈棕黄色颗粒,主要定位于翼状胬肉组织的细胞核膜上,细胞质也有染色,进展期棕黄色颗粒分布于整个胞质及核膜周边。翼状胬肉组MMP-9平均秩次为28.50,正常结膜组MMP-9平均秩次为13.50,提示翼状胬肉组MMP-9表达的强度高于正常结膜组具有显著统计学差异(P=0.001)。翼状胬肉在进展期组MMP-9平均秩次为12.29,静止期组MMP-9平均秩次为5.50,提示翼状胬肉进展期MMP-9阳性表达率强于静止期具有统计学差异(P=0.033)。VEGF在翼状胬肉组织中表达,亦呈棕黄色颗粒,位于翼状胬肉的上皮层、间质内皮细胞及血管壁上,在进展期与静止期的上皮层表达均呈阳性。翼状胬肉组VEGF平均秩次为28.61,正常结膜组VEGF平均秩次为13.05,提示翼状胬肉组VEGF的表达高于正常结膜组具有显著统计学差异(P=0.001)。翼状胬肉进展期组VEGF平均秩次为14.93,静止期组VEGF平均秩次为7.50,提示翼状胬肉组进展期VEGF的阳性表达率高于静止期组具有显著统计学差异(P=0.037)。MMP-9与VEGF对于翼状胬肉进展期诊断无显著性差异(P=0.727), kappa=0.436, P=0.010,提示MMP-9与VEGF在翼状胬肉组织中表达呈正相关性。结论MMP-9及VEGF的高表达与翼状胬肉具有一定关系,并且MMP-9和VEGF在翼状胬肉进展期中表达呈正相关性。

    Objective:To study on the expression of matrix metalloproteinases (MMP-9) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in pterygium, discus the correlation of them, and to study the function of MMP-9and VEGF in the progress of pterygium.Methods:Using the technique of immuno-histochemistry, we compared the different expression of MMP-9and VEGF between the aggressive and quiescent period of human pterygium.Results:The positive expression of MMP-9in Pterygium tissue was brown yellow particles, mainly located in pterygium tissue cell membrane,cytoplasm also had dyeing, advanced brown granules were distributed throughout the cytoplasm and nuclear membrane surrounding.The mean rank of MMP-9in the Pterygium group was28.50, the mean rank of MMP-9in the normal conjunctival group was13.50, which indicated the MMP-9expression in the pterygium group was intensity higher than in the normal conjunctival group(P=0.001). The mean rank of MMP-9in the pterygium progressive stage was12.29, and in the quiescent period group was5.50, which indicated the MMP-9expression in the pterygium progressive stage was higher than in the quiescent period group(P=0.033).The positive expression of VEGF in Pterygium tissue was also with a brown granules, located in pterygium epithelial, interstitial endothelial cells and vascular wall in advance, and the quiescent period of cortical expression of positive. The mean rank of VEGF in the pterygium group was28.61, the mean rank of VEGF in the normal conjunctival group was13.05, which indicated that the VEGF expression in the pterygium group was intensity higher than in the normal conjunctival group(P=0.001). The mean rank of VEGF in the pterygium progressive stage was14.93, and in the quiescent period group was7.50, which indicated the VEGF expression in the pterygium progressive stage was higher than in the quiescent period group (P=0.037).There were no significant difference between MMP-9and VEGF for the diagnosis of pterygium (P=0.727), kappa=0.436, P=0.010,which indicated that MMP-9and VEGF has much certain positive correlation.Conclusions:VEGF and MMP-9were closely linked and play an very important role in the occurrence and development of pterygium.

        翼状胬肉进行期与静止期MMP-9和VEGF的表达及其相关性研究

摘要3-7ABSTRACT7-8前言10-121 材料和方法12-142 结果14-173 讨论17-244 参考文献24-27全文总结与展望27-28综述28-36    参考文献33-36附录二 中英文对照缩略词表36-37攻读硕士期间发表论文及成果37-38致谢38-40统计学审稿证明40

  本文关键词：翼状胬肉进行期与静止期MMP-9和VEGF的表达及其相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。