间充质干细胞对自体免疫性葡萄膜炎眼部Th17细胞的作用研究

发布时间：2016-11-19 16:55

  本文关键词：间充质干细胞对自体免疫性葡萄膜炎眼部Th17细胞的作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

《天津医科大学》 2012年

间充质干细胞对自体免疫性葡萄膜炎眼部Th17细胞的作用研究

袁立飞  

【摘要】：目的葡萄膜炎是眼科常见的自体免疫性疾病,Th17细胞是近年来新发现的CD4+T细胞亚群,在包括葡萄膜炎在内的多种自体免疫性疾病(autoimmune disease, AID)中发挥重要作用。间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是一种具有免疫抑制特性的多能成体干细胞,在体内外可抑制多种免疫细胞的增殖和功能。本研究通过建立实验性自体免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveoretinitis, EAU)模型,观察MSCs对EAU免疫调节作用,检测Thl7细胞及其分泌的主要炎性因子IL-17在眼部的动态变化,以阐明MSCs对EAU的免疫调节机制,为临床治疗葡萄膜炎提供新的方法和理论基础。 方法 1.MSCs培养：分离培养Wistar大鼠骨髓MSCs,流式细胞仪检测培养细胞的表型。 2.EAU模型制作：Lewis大鼠75只,随机实验组70只,空白对照组5只。光感受器间维生素A类结合蛋白((interphotoreceptor retinoid-binding protein, IRBP)R16片段与含有结核杆菌素HR37a2.5g/L的弗氏完全佐剂(CFA)等体积混合充分乳化,单后足垫皮下注射免疫实验组大鼠建立EAU动物模型。 3. MSCs治疗：EAU造模后随机分为模型对照组和MSCs治疗组各35只。MSCs治疗组分别于免疫的同时和EAU发病高峰期行MSCs尾静脉注射治疗,连续三天,模型对照组注射等体积PBS。 4.临床观察：免疫后第4天,每日在裂隙灯显微镜下观察大鼠眼部炎症反应,并根据Caspi临床分级进行评分。 5.组织病理学观察：免疫同时治疗组及模型对照组分别于免疫后第6,9,12,15,20天；EAU高峰期治疗组分别于免疫后第15,20天,处死大鼠并摘除单侧眼球制备视网膜组织切片,HE染色后行组织病理学观察,参照Caspi组织学分级法进行评。 6.免疫组织化学染色：取制备好的视网膜切片,免疫组化SP法检测各组相应时间点视网膜组织中IL-17的表达。 7.房水采集及检测：大鼠麻醉后,30G针头行双眼前房穿刺取房水,ELISA法检测房水中IL-17的表达。 8.眼部浸润细胞提取及Th17细胞和Treg细胞检测：大鼠麻醉后,行冷PBS心脏灌注,摘除各组大鼠单侧眼球,分离眼部细胞,流式细胞仪检测CD4+IL-17+细胞和CD4+CD25+foxp3+细胞比例。 结果 1.成功分离并鉴定MSC。 2.成功建立EAU动物模型。 3.与对照组相比,免疫同时(0天)和免疫后12天行MSCs治疗,大鼠眼部临床表现均显著减轻(P0.05)；视网膜组织病理学改变与临床表现变化一致,MSCs治疗后视网膜炎细胞浸润和组织结构破坏明显减轻,各时间点组织病理学均显著低于模型对照组(P0.05)。 4.免疫组织化学染色显示,0天MSCs治疗组于免疫后6,9,12,15,20天,12天MSCs治疗组于免疫后15,20天,大鼠眼视网膜IL-17蛋白阳性表达的平均A值均显著低于相应模型对照组(P0.05)。 5.房水IL-17ELISA检测结果显示：与相应模型对照组相比,0天和12天MSCs治疗组相应时间点房水中IL-17表达量均明显降低(P0.05)。 6.眼部浸润细胞流式检测显示,与相应模型对照组相比,0天和12天MSCs治疗组相应时间点眼部Th17细胞比例均显著降低(P0.05),Treg细胞比例显著升高(P0.05)。 结论EAU的发生发展与Th17细胞及其因子IL-17在眼部的动态变化密切相关；MSCs可以有效抑制EAU的发生发展；MSCs治疗后视网膜组织和房水中IL-17的表达降低,Th17细胞在眼部浸润减少,Treg细胞浸润增加。

【关键词】：
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R773.9
【目录】：

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